| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第15-37页 |
| 1.1 栖热菌及其噬菌体以及TSP4基因组特征 | 第15-20页 |
| 1.1.1 栖热菌及其噬菌体的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.1.2 栖热菌噬菌体的简介 | 第16-18页 |
| 1.1.3 栖热菌噬菌体TSP4特征 | 第18-20页 |
| 1.2 脱氧尿苷焦磷酸酶 | 第20-22页 |
| 1.2.1 脱氧尿苷焦磷酸酶的简介 | 第20页 |
| 1.2.2 脱氧尿苷焦磷酸酶的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2.3 脱氧尿苷焦磷酸酶的活性测定方法 | 第21-22页 |
| 1.3 分子伴侣的简介 | 第22-28页 |
| 1.3.1 分子伴侣家族 | 第22-24页 |
| 1.3.2 分子伴侣的功能 | 第24-26页 |
| 1.3.3 分子伴侣TSPcpn47 | 第26-28页 |
| 1.4 蛋白热稳定性的研究 | 第28-35页 |
| 1.4.1 蛋白质的热稳定性 | 第28-29页 |
| 1.4.2 蛋白质热稳定性机制 | 第29-31页 |
| 1.4.3 提高蛋白质热稳定性的方法 | 第31-34页 |
| 1.4.4 蛋白质热稳定性研究方法和检测手段 | 第34-35页 |
| 1.4.5 蛋白质热稳定性的研究意义 | 第35页 |
| 1.5 本论文研究的目的及意义 | 第35-37页 |
| 第二章 TSP4噬菌体脱氧尿苷焦磷酸酶重组蛋白的表达及活性的初步研究 | 第37-66页 |
| 2.1 TSP4噬菌体脱氧尿苷焦磷酸酶的生物信息学分析 | 第37-43页 |
| 2.1.1 氨基酸序列同源性分析方法 | 第37-38页 |
| 2.1.2 氨基酸序列同源性分析结果 | 第38-43页 |
| 2.2 TSP4噬菌体脱氧尿苷焦磷酸酶重组蛋白的构建和表达 | 第43-55页 |
| 2.2.1 栖热菌噬菌体TSP4基因组的提取 | 第44页 |
| 2.2.2 引物的合成 | 第44-45页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第45页 |
| 2.2.4 PCR产物的胶回收 | 第45-46页 |
| 2.2.5 PCR产物双酶切 | 第46-47页 |
| 2.2.6 表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| 2.2.7 重组质粒转化 | 第48-49页 |
| 2.2.8 重组蛋白Ro-pET32a-Dutp的表达 | 第49-50页 |
| 2.2.9 脱氧尿苷焦磷酸酶的纯化 | 第50-51页 |
| 2.2.10 蛋白含量的测定 | 第51-52页 |
| 2.2.11 脱氧尿苷焦磷酸酶酶活检测 | 第52-55页 |
| 2.3 结果 | 第55-64页 |
| 2.3.1 脱氧尿苷焦磷酸酶基因的克隆结果 | 第55-56页 |
| 2.3.2 重组质粒的菌落PCR | 第56-57页 |
| 2.3.3 重组脱氧尿苷焦磷酸酶基因的表达图谱 | 第57-58页 |
| 2.3.4 脱氧尿苷焦磷酸酶的纯化图谱 | 第58-59页 |
| 2.3.5 脱氧尿苷焦磷酸酶的底物特异性结果 | 第59-60页 |
| 2.3.6 温度对脱氧尿苷焦磷酸酶的影响结果 | 第60-61页 |
| 2.3.7 pH值对脱氧尿苷焦磷酸酶的影响结果 | 第61-62页 |
| 2.3.8 金属离子对脱氧尿苷焦磷酸酶的影响结果 | 第62-63页 |
| 2.3.9 脱氧尿苷焦磷酸酶体外聚合体的电泳图谱 | 第63-64页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 高温噬菌体蛋白的热稳定性研究以及分子伴侣TSPcpn47对其热稳定性的影响 | 第66-74页 |
| 3.1 研究的目的和意义 | 第66页 |
| 3.2 材料和方法 | 第66-69页 |
| 3.2.1 不同温度下脱氧尿苷焦磷酸酶的热稳定性研究 | 第67页 |
| 3.2.2 用ANS荧光探针法检测脱氧尿苷焦磷酸酶的热稳定性 | 第67-68页 |
| 3.2.3 检测分子伴侣TSPcpn47对脱氧尿苷焦磷酸酶dUTPase在热变性环境的保护作用 | 第68-69页 |
| 3.3 结果 | 第69-73页 |
| 3.3.1 不同温度下脱氧尿苷焦磷酸酶的热稳定性图表 | 第69-70页 |
| 3.3.2 ANS荧光探针法检测脱氧尿苷焦磷酸酶的热稳定性 | 第70-71页 |
| 3.3.3 分子伴侣TSPcpn47对脱氧尿苷焦磷酸酶dUTPase在热变性环境的保护作用 | 第71-73页 |
| 3.4 结论 | 第73-74页 |
| 第四章 总结与展望 | 第74-76页 |
| 4.1 总结 | 第74-75页 |
| 4.2 展望 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录A (攻读硕士期间发表论文目录) | 第83-84页 |
| 附录B (主要溶液及其配制) | 第84-89页 |
| B.1 主要培养基配方 | 第84-85页 |
| B.1.1 DSM88液体培养基 | 第84页 |
| B.1.2 DSM88培养基固体培养基 | 第84-85页 |
| B.1.3 液体LB培养基 | 第85页 |
| B.1.4 固体LB培养基 | 第85页 |
| B.2 主要溶液及其配制 | 第85-88页 |
| B.2.1 Amp(100mg/ml) | 第85页 |
| B.2.2 Kana(100mg/ml) | 第85页 |
| B.2.3 溴化乙锭溶液 | 第85-86页 |
| B.2.4 1%琼脂糖凝胶的配制 | 第86页 |
| B.2.5 TAE电泳缓冲液 | 第86页 |
| B.2.6 30%(W/V)Acrylamide | 第86页 |
| B.2.7 10%(W/V)过硫酸铵 | 第86页 |
| B.2.8 SDS-PAGE5%浓缩胶 | 第86-87页 |
| B.2.9 SDS-PAGE12%分离胶 | 第87页 |
| B.2.10 考马斯亮蓝R-250染色液 | 第87页 |
| B.2.11 考马斯亮蓝染色脱色液 | 第87页 |
| B.2.12 5×LoadingBuffer | 第87-88页 |
| B.2.13 5×Tris-GlycineBuffer(SDS-PAGE电泳缓冲液) | 第88页 |
| B.3 主要仪器 | 第88-89页 |
| B.4 试剂及酶制品 | 第89页 |
