| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 绪论 | 第10-20页 |
| 一、哺乳动物牙齿发育 | 第10-11页 |
| 二、干细胞向成牙本质细胞分化的研究 | 第11-14页 |
| (一) 干细胞与牙齿再生的研究进展 | 第11-13页 |
| (二) 诱导牙源性干细胞向成牙本质细胞分化的研究 | 第13-14页 |
| 三、真核生物启动子结构 | 第14-15页 |
| 四、外源基因导入细胞常用的方法 | 第15-17页 |
| 五、研究目的和意义 | 第17-20页 |
| 第一章 材料与方法 | 第20-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 1.1.1 实验仪器与耗材 | 第20页 |
| 1.1.2 菌株、载体与细胞 | 第20-21页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第21页 |
| 1.1.4 实验试剂配制 | 第21-24页 |
| 1.1.5 引物 | 第24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-42页 |
| 1.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 1.2.2 DNA提取 | 第25-26页 |
| 1.2.3 PCR基因扩增 | 第26-29页 |
| 1.2.4 限制性内切酶酶切 | 第29页 |
| 1.2.5 电泳及割胶纯化 | 第29-30页 |
| 1.2.6 末端去磷酸化和连接反应 | 第30-31页 |
| 1.2.7 质粒或连接产物转化 | 第31页 |
| 1.2.8 转化子的鉴定 | 第31-32页 |
| 1.2.9 细胞的复苏、传代、扩大培养及冻存 | 第32-33页 |
| 1.2.10 诱导hEDMC/ihEDMC细胞表达DSPP | 第33页 |
| 1.2.11 细胞总RNA的提取 | 第33-34页 |
| 1.2.12 Real-time PCR反应 | 第34-35页 |
| 1.2.13 双荧光素酶报告系统检测启动子活性 | 第35-36页 |
| 1.2.14 磷酸钙沉淀法转染293T细胞,生产慢病毒 | 第36-38页 |
| 1.2.15 慢病毒浓缩与滴度测定 | 第38-39页 |
| 1.2.16 慢病毒感染hEDMC/ihEDMC4细胞(以6cm培养皿为例) | 第39页 |
| 1.2.17 细胞X-Gal染色 | 第39-42页 |
| 第二章 结果 | 第42-66页 |
| 2.1 细胞表达DSPP体系的建立 | 第42-43页 |
| 2.2 DSPP启动子有效序列位置的确定 | 第43-56页 |
| 2.2.1 软件分析DSPP启动子拟序列的结构特征 | 第43-44页 |
| 2.2.2 pGL3-LUC-DSPP promoter载体的构建 | 第44-53页 |
| 2.2.3 hDSPP启动子拟序列活性检测(双荧光素酶报告系统检测法) | 第53-56页 |
| 2.3 人DSPP启动子报告载体构建及其用于牙向分化检测的可行性分析 | 第56-66页 |
| 2.3.1 phDSPP_((-2500-+54))-LacZ载体的构建 | 第56-60页 |
| 2.3.2 phDSPP_((-2500-+54))-LacZ慢病毒的生产及滴度测定 | 第60-62页 |
| 2.3.3 phDSPP((-2500-+54))-LacZ报告载体用于牙向分化检测的可行性分析 | 第62-66页 |
| 第三章 分析与讨论 | 第66-70页 |
| 3.1 细胞表达DSPP体系的建立 | 第66-67页 |
| 3.2 DSPP启动子有效序列位置的确定 | 第67-69页 |
| 3.2.1 pGL3-Basic-DSPP promoter载体的构建 | 第67-68页 |
| 3.2.2 启动子活性检测 | 第68-69页 |
| 3.3 DSPP promoter报告体系的建立及可行性分析 | 第69-70页 |
| 3.3.1 慢病毒包装生产 | 第69页 |
| 3.3.2 phDSPP_((-2500-+54))-LacZ用于细胞牙向分化检测的可行性分析 | 第69-70页 |
| 第四章 实验结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 个人简历 | 第82-84页 |
