| 致谢 | 第5-12页 |
| 中文摘要 | 第12-16页 |
| Summary | 第16页 |
| 第一篇 文献综述与立论依据 | 第20-40页 |
| 第一章 弗兰克氏菌的研究进展 | 第20-34页 |
| 1 弗兰克氏菌共生结瘤固氮的特点 | 第20-22页 |
| 1.1 弗兰克氏菌与根瘤菌的比较 | 第20页 |
| 1.2 弗兰克氏菌共生结瘤固氮特点 | 第20-22页 |
| 2 弗兰克氏菌与放线结瘤植物常规研究进展(略) | 第22页 |
| 3 弗兰克氏菌的生态 | 第22-24页 |
| 4 弗兰克氏菌与非豆科木本植物共生固氮的分子生物学 | 第24-31页 |
| 4.1 弗兰克氏菌基因组的基本特征 | 第24页 |
| 4.2 质粒 | 第24-25页 |
| 4.3 弗兰克氏菌中共生固氮相关基因 | 第25-27页 |
| 4.4 弗兰克氏菌的rRNA基因和tRNA基因 | 第27-28页 |
| 4.5 放线结瘤植物根瘤中的结瘤固氮相关基因 | 第28-29页 |
| 4.6 与环境胁迫相关的基因 | 第29-30页 |
| 4.7 转基因 | 第30页 |
| 4.8 弗兰克氏菌的遗传多样性 | 第30-31页 |
| 5 弗兰克氏菌与宿主植物的共生效应 | 第31-32页 |
| 5.1 弗兰克氏菌和宿主植物对共生效应的影响 | 第31-32页 |
| 5.2 多重共生 | 第32页 |
| 6 弗兰克氏菌的应用 | 第32-34页 |
| 第二章 杨梅植株营养及其分子生物学研究进展 | 第34-37页 |
| 1 杨梅植株营养特性 | 第34页 |
| 2 需肥特点与合理施肥 | 第34-36页 |
| 3 杨梅植株分子生物学研究进展 | 第36-37页 |
| 第三章 立论依据与研究内容 | 第37-40页 |
| 1 立论依据、目的意义 | 第37-38页 |
| 2 研究思路和研究内容 | 第38-40页 |
| 第二篇 弗兰克氏菌的分离鉴定、生理生化特性、优良菌株的筛选及多样性 | 第40-91页 |
| 第四章 弗兰克氏菌的分离与鉴定 | 第40-49页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1 根瘤的采集 | 第40-41页 |
| 1.2 分离培养基 | 第41页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-42页 |
| 2.1 分离方法 | 第41页 |
| 2.2 回接试验 | 第41-42页 |
| 2.3 固氮酶活性测定 | 第42页 |
| 2.4 菌体形态观察 | 第42页 |
| 2.5 革兰氏染色 | 第42页 |
| 2.6 PCR检测 | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.1 分离培养结果 | 第42-45页 |
| 3.2 分离株的形态特征 | 第45-46页 |
| 3.2.1 菌落形态 | 第45-46页 |
| 3.2.2 菌体形态 | 第46页 |
| 3.3 回接宿主形成根瘤 | 第46页 |
| 3.4 分离株的固氮活性和革兰氏染色 | 第46页 |
| 3.5 nif HD基因的扩增 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 第五章 弗兰克氏菌的培养特性 | 第49-59页 |
| 1 材料与方法 | 第49-52页 |
| 1.1 试料 | 第49页 |
| 1.2 试剂的配制 | 第49-50页 |
| 1.3 蛋白质浓度标准曲线的制备 | 第50页 |
| 1.4 培养特性 | 第50-51页 |
| 1.5 碳源、氮源利用 | 第51页 |
| 1.6 碳源浓度对MPC11菌株生长的影响 | 第51页 |
| 1.7 pH对MPC11和MPA11生长的影响 | 第51页 |
| 1.8 温度对MPC11生长的影响 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-58页 |
| 2.1 蛋白质浓度标准曲线的建立 | 第52页 |
| 2.2 培养特性 | 第52-54页 |
| 2.2.1 在固体培养基上的生长情况 | 第52-53页 |
| 2.2.2 菌落形态特征 | 第53-54页 |
| 2.2.3 在液体培养基上的生长情况 | 第54页 |
| 2.3 碳源、氮源利用 | 第54-57页 |
| 2.3.1 碳源利用 | 第54-55页 |
| 2.3.2 氮源利用 | 第55-56页 |
| 2.3.3 在不同碳源、氮源液体培养基中菌落或菌丝团特征 | 第56-57页 |
| 2.4 pH对MPC11和MPA11生长的影响 | 第57页 |
| 2.5 温度对MPC11生长的影响 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 杨梅根瘤Frankia菌对重金属的抗性 | 第59-67页 |
| 1 材料与方法 | 第59-61页 |
| 1.1 供试菌株 | 第59-60页 |
| 1.2 供试重金属 | 第60页 |
| 1.3 供试抗生素 | 第60页 |
| 1.4 接种剂的制备 | 第60页 |
| 1.5 重金属抗性试验 | 第60页 |
| 1.6 抗生素敏感性试验 | 第60-61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-64页 |
| 2.1 Frankia菌对9种重金属元素的抗性分析 | 第61-63页 |
| 2.2 MPA12菌株在含铅低磷液体培养基中生长及固氮酶活性 | 第63页 |
| 2.3 显微镜观察 | 第63-64页 |
| 2.4 对抗生素敏感性分析 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 第七章 Frankia优良菌株筛选 | 第67-75页 |
| 1 材料与方法 | 第67-68页 |
| 1.1 供试菌株 | 第67页 |
| 1.2 仪器 | 第67-68页 |
| 1.3 试剂 | 第68页 |
| 1.4 固氮酶活性测定 | 第68页 |
| 1.4.1 乙炔的纯化 | 第68页 |
| 1.4.2 乙烯量的测定 | 第68页 |
| 1.5 菌株生长量的测定 | 第68页 |
| 1.6 侵染力测定 | 第68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-74页 |
| 2.1 乙炔和乙烯在气相色谱中保留值的测定 | 第68-69页 |
| 2.2 固氮酶活性 | 第69-71页 |
| 2.3 菌株在有氮BAP液体培养基中的生长情况 | 第71页 |
| 2.4 菌株在无氮BAP液体培养基中的生长情况 | 第71-72页 |
| 2.5 侵染力分析 | 第72-74页 |
| 3 讨论 | 第74-75页 |
| 第八章 杨梅根瘤Frankia菌分离株的遗传多样性 | 第75-81页 |
| 1 材料与方法 | 第75-77页 |
| 1.1 供试菌株 | 第75页 |
| 1.2 菌株培养 | 第75-76页 |
| 1.3 Frankia菌基因组DNA的提取 | 第76页 |
| 1.4 16S rDNA PCR扩增 | 第76页 |
| 1.5 RFLP | 第76-77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-79页 |
| 2.1 菌株在培养基上的颜色 | 第77页 |
| 2.2 PCR扩增 | 第77-78页 |
| 2.3 扩增产物的酶切图谱 | 第78页 |
| 2.4 菌株间相似率的比较 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79-81页 |
| 3.1 菌株表型多样性 | 第79页 |
| 3.2 Frankia菌的遗传多样性 | 第79-81页 |
| 第九章 杨梅根瘤共生菌的自然多样性 | 第81-91页 |
| 1 材料与方法 | 第82-84页 |
| 1.1 根瘤的采集和供试Frankia菌株 | 第82页 |
| 1.2 根瘤DNA的提取 | 第82页 |
| 1.3 PCR扩增 | 第82页 |
| 1.4 基因克隆和测序 | 第82页 |
| 1.5 序列比对与聚类分析 | 第82-84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-88页 |
| 2.1 PCR扩增 | 第84页 |
| 2.2 序列分析 | 第84-88页 |
| 3 讨论 | 第88-91页 |
| 第三篇 固氮结构基因的克隆与杨梅转基因研究 | 第91-105页 |
| 第十章 杨梅根瘤固氮结构基因的分离克隆 | 第91-98页 |
| 1 材料与方法 | 第91-92页 |
| 1.1 主要试剂 | 第91页 |
| 1.2 根瘤基因组DNA的提取及PCR | 第91-92页 |
| 1.3 目的DNA片段重组入质粒载体 | 第92页 |
| 1.4 测序与分析 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-97页 |
| 2.1 PCR产物的获得和克隆 | 第92-93页 |
| 2.2 nifHDK基因序列与结构分析 | 第93-97页 |
| 2.2.1 nifHDK核苷酸序列 | 第95-96页 |
| 2.2.2 NifH和NifD的氨基酸序列 | 第96-97页 |
| 2.2.3 nifH和nifD基因的密码子分析 | 第97页 |
| 3 讨论 | 第97-98页 |
| 第十一章 发根农杆菌介导的杨梅遗传转化 | 第98-105页 |
| 1 材料与方法 | 第99-101页 |
| 1.1 植物材料 | 第99页 |
| 1.2 供试菌株和质粒 | 第99页 |
| 1.3 农杆菌的转化 | 第99页 |
| 1.4 农杆菌及农杆菌中质粒的鉴定 | 第99页 |
| 1.4.1 3-酮基乳糖反应 | 第99页 |
| 1.4.2 农杆菌中质粒的鉴定 | 第99页 |
| 1.5 杨梅的转化 | 第99-100页 |
| 1.5.1 发根农杆菌的培养 | 第99-100页 |
| 1.5.2 杨梅外植体的预培养 | 第100页 |
| 1.5.3 共培养法诱导毛状根 | 第100页 |
| 1.5.4 带毛状根植株的培养 | 第100页 |
| 1.6 转化材料的检测 | 第100-101页 |
| 1.6.1 GUS检测 | 第100页 |
| 1.6.2 PCR检测 | 第100-101页 |
| 1.6.3 Southern检测 | 第101页 |
| 2 结果与分析 | 第101-104页 |
| 2.1 杨梅品种对携带pBI121质粒或pDC202质粒的R15834的敏感性 | 第101-102页 |
| 2.2 不同感染时间对毛状根诱导率的影响 | 第102-103页 |
| 2.3 GUS活性检测 | 第103页 |
| 2.4 PCR检测和Southern杂交 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-105页 |
| 第四篇 营养元素及铅对杨梅根瘤和植株生长的影响 | 第105-124页 |
| 第十二章 磷和钾对杨梅根瘤形成和植株生长的影响 | 第105-110页 |
| 1 材料与方法 | 第105-107页 |
| 1.1 主要试材 | 第105页 |
| 1.2 试验方法 | 第105-107页 |
| 1.2.1 土壤基本理化性质的测定 | 第105-106页 |
| 1.2.2 试验设计 | 第106页 |
| 1.2.3 施肥及管理 | 第106页 |
| 1.2.4 结瘤量、根瘤固氮活性、根系及枝叶生长量测定 | 第106-107页 |
| 2 结果与分析 | 第107-108页 |
| 2.1 土壤基本理化性质 | 第107页 |
| 2.2 不同P、K水平对杨梅结瘤和固氮活性的影响 | 第107-108页 |
| 2.3 不同P、K水平对杨梅植株生长的影响 | 第108页 |
| 3 讨论 | 第108-110页 |
| 第十三章 微量元素对杨梅根瘤形成和植株生长的影响 | 第110-116页 |
| 1 材料与方法 | 第111-112页 |
| 1.1 主要试材 | 第111页 |
| 1.2 试验方法 | 第111-112页 |
| 1.2.1 试验设计 | 第111页 |
| 1.2.2 施肥及管理 | 第111页 |
| 1.2.3 结瘤量、根瘤固氮活性、根系及枝叶生长量测定 | 第111页 |
| 1.2.4 植株Mo、Co、Ni含量的测定 | 第111-112页 |
| 1.2.5 土壤Mo、Co、Ni含量的测定 | 第112页 |
| 2 结果与分析 | 第112-115页 |
| 2.1 不同Mo、Co、Ni水平对杨梅生长的影响 | 第112-113页 |
| 2.2 不同Mo、Co、Ni水平对杨梅结瘤和固氮的影响 | 第113-114页 |
| 2.3 Mo、Co、Ni元素在杨梅植株中的分布 | 第114-115页 |
| 3 讨论 | 第115-116页 |
| 第十四章 硫在杨梅体内的分布及与鉬和钴的关系 | 第116-119页 |
| 1 材料与方法 | 第116-117页 |
| 2 结果与分析 | 第117-118页 |
| 2.1 杨梅对硫的吸收及硫在植株体内的分布 | 第117页 |
| 2.2 鉬和钴对杨梅吸收硫的影响 | 第117-118页 |
| 3 讨论 | 第118-119页 |
| 第十五章 铅对杨梅幼苗生长的影响 | 第119-124页 |
| 1 材料与方法 | 第119-120页 |
| 1.1 材料 | 第119页 |
| 1.2 方法 | 第119-120页 |
| 1.2.1 杨梅幼苗的培育 | 第119页 |
| 1.2.2 处理方法 | 第119页 |
| 1.2.3 调查与检测 | 第119-120页 |
| 2 结果与分析 | 第120-122页 |
| 2.1 铅对杨梅生长的影响 | 第120-121页 |
| 2.2 杨梅地上部与地下部的干重 | 第121页 |
| 2.3 杨梅幼苗根和叶片中铅的含量 | 第121-122页 |
| 3 讨论 | 第122-124页 |
| 附件1 | 第124-127页 |
| 附件2 | 第127-129页 |
| 参考文献 | 第129-139页 |
