| 致谢 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 细胞内蛋白质的核磁共振波谱 | 第13-14页 |
| 1.2 ~(19)F核磁共振方法在细胞内蛋白质的构象、动态学以及弱相互作用研究中的应用 | 第14-22页 |
| 1.2.1 蛋白质的~(19)F标记与信号归属 | 第14-19页 |
| 1.2.2 ~(19)F化学位移与蛋白质的构象 | 第19-20页 |
| 1.2.3 ~(19)F弛豫及信号线宽与蛋白质的动态及弱相互作用 | 第20-22页 |
| 1.3 不同细胞内目的蛋白质的富集与核磁共振研究 | 第22-23页 |
| 1.3.1 原核大肠杆菌细胞内目的蛋白质的富集与~(19)F核磁共振研究 | 第22页 |
| 1.3.2 真核非洲爪蟾卵母细胞内目的蛋白质品的富集与核磁共振研究 | 第22-23页 |
| 1.3.3 人体HeLa细胞内目的蛋白质的富集与核磁共振研究 | 第23页 |
| 1.4 主要蛋白质模型 | 第23-24页 |
| 2 大肠杆菌细胞内蛋白质的~(19)F核磁共振研究：标记策略选择与~(19)F标记优化 | 第24-42页 |
| 2.1 前言 | 第24-29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-33页 |
| 2.2.1 突变体质粒的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.2 蛋白质的~(19)F标记 | 第30-31页 |
| 2.2.3 大肠杆菌细胞内蛋白质的核磁样品制备 | 第31页 |
| 2.2.4 蛋白质样品的表达纯化与核磁样品制备 | 第31-33页 |
| 2.2.5 ~(19)F NMR实验 | 第33页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第33-41页 |
| 2.4 结论 | 第41-42页 |
| 3 大肠杆菌细胞内蛋白质信号增宽机制的研究—发展(i9)~FNMR方法表征原核细胞内的粘度、蛋白质弱相互作用及磁不均一性对蛋白质的(19)~F信号线宽的贡献 | 第42-55页 |
| 3.1 前言 | 第42-43页 |
| 3.2 实验 | 第43-46页 |
| 3.2.1 UBQ突变体的质粒构建 | 第43-44页 |
| 3.2.2 蛋白质样品的制备 | 第44页 |
| 3.2.3 细胞内蛋白质的核磁样品制备 | 第44页 |
| 3.2.4 细胞裂解物的制备 | 第44-45页 |
| 3.2.5 甘油水溶液、细胞裂解液的配制以及粘度测定 | 第45页 |
| 3.2.6 ~(19)F NMR实验 | 第45页 |
| 3.2.7 Model-free拟合 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-54页 |
| 3.4 结论 | 第54-55页 |
| 4 发展~(19)F核磁共振方法探测细胞内钙调蛋白与微量顺磁离子的相互作用 | 第55-64页 |
| 4.1 前言 | 第55-56页 |
| 4.2 材料与方法 | 第56-58页 |
| 4.2.1 3FY标记的钙调蛋白及其突变体样品的制备与纯化 | 第56页 |
| 4.2.2 细胞内蛋白质的核磁样品制备 | 第56页 |
| 4.2.3 甘油水溶液、细胞裂解液的配制以及粘度测定 | 第56-57页 |
| 4.2.4 ~(19)F NMR实验 | 第57页 |
| 4.2.5 稀溶液中金属离子的滴定实验 | 第57页 |
| 4.2.6 原子吸收光谱法测定大肠杆菌细胞中各金属离子含量的样品制备 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第58-63页 |
| 4.4 结论 | 第63-64页 |
| 5 非洲爪蟾卵母细胞内蛋白质的核磁共振研究：标记策略与信号增宽机制研究 | 第64-73页 |
| 5.1 前言 | 第64页 |
| 5.2 材料与方法 | 第64-66页 |
| 5.2.1 蛋白质的表达与纯化 | 第64-65页 |
| 5.2.2 非洲爪蟾卵母细胞的制备 | 第65页 |
| 5.2.3 显微注射 | 第65页 |
| 5.2.4 NMR实验 | 第65-66页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第66-71页 |
| 5.4 结论 | 第71-73页 |
| 6 发展~(19)F核磁共振方法观测真核细胞内钙离子诱导钙调蛋白的构象转变 | 第73-83页 |
| 6.1 前言 | 第73页 |
| 6.2 材料与方法 | 第73-75页 |
| 6.2.1 蛋白质样品的表达与纯化 | 第73-74页 |
| 6.2.2 非洲爪蟾卵母细胞内蛋白质的核磁样品制备 | 第74页 |
| 6.2.3 体外Ca~(2+)竞争性结合实验的样品制备 | 第74-75页 |
| 6.2.4 NMR实验 | 第75页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第75-82页 |
| 6.4 结论 | 第82-83页 |
| 7 蛋白质在非洲爪蟾卵母细胞成熟与死亡过程中的核磁共振研究 | 第83-90页 |
| 7.1 前言 | 第83-84页 |
| 7.2 材料与方法 | 第84-85页 |
| 7.2.1 ~(15)N富集、3FY标记蛋白质的样品制备 | 第84页 |
| 7.2.2 S129磷酸化的SYN的制备 | 第84-85页 |
| 7.2.3 成熟非洲爪蟾卵细胞的制备 | 第85页 |
| 7.2.4 显微注射 | 第85页 |
| 7.2.5 NMR实验 | 第85页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第85-89页 |
| 7.4 结论 | 第89-90页 |
| 8 发展~(19)FNMR方法研究拥挤条件下和不同细胞内蛋白质旋转运动的尺寸效应 | 第90-98页 |
| 8.1 前言 | 第90-91页 |
| 8.2 材料与方法 | 第91-94页 |
| 8.2.1 GB1串联体的构建 | 第91页 |
| 8.2.2 蛋白质的标记与表达纯化 | 第91-92页 |
| 8.2.3 蛋白质样品的处理 | 第92页 |
| 8.2.4 细胞内蛋白质的核磁样品制备 | 第92页 |
| 8.2.5 NMR实验 | 第92-94页 |
| 8.3 结果与讨论 | 第94-97页 |
| 8.4 结论 | 第97-98页 |
| 9 人体HeLa细胞内目的蛋白质的富集与核磁共振研究 | 第98-104页 |
| 9.1 前言 | 第98-99页 |
| 9.2 材料与方法 | 第99-101页 |
| 9.2.1 质粒构建 | 第99页 |
| 9.2.2 ~(15)N富集、3FY标记蛋白质的表达与纯化 | 第99-100页 |
| 9.2.3 细胞内目的蛋白质的富集 | 第100页 |
| 9.2.4 NMR实验 | 第100-101页 |
| 9.3 结果与讨论 | 第101-104页 |
| 10 总结与展望 | 第104-109页 |
| 10.1 原核大肠杆菌细胞内蛋白质的~(19)F核磁共振研究 | 第104-105页 |
| 10.1.1 大肠杆菌细胞内蛋白质的标记策略选择与~(19)F标记优化 | 第104页 |
| 10.1.2 大肠杆菌细胞内蛋白质的信号增宽机制研究 | 第104-105页 |
| 10.1.3 发展~(19)FNMR方法探测细胞内钙调蛋白与微量顺磁离子的相互作用 | 第105页 |
| 10.2 真核非洲爪蟾卵母细胞内蛋白质的核磁共振研究 | 第105-107页 |
| 10.2.1 非洲爪蟾卵母细胞内蛋白质的标记策略及信号增宽机制研究 | 第105-106页 |
| 10.2.2 发展~(19)FNMR方法观测卵母细胞内钙离子诱导钙调蛋白的构象转变 | 第106-107页 |
| 10.2.3 蛋白质在非洲爪蟾卵母细胞成熟与死亡过程中的核磁共振研究 | 第107页 |
| 10.3 ~(19)FNMR方法研究不同细胞内蛋白质旋转运动的尺寸效应 | 第107-108页 |
| 10.4 人体HeLa细胞内目的蛋白质的富集与核磁共振研究 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-122页 |
| 作者简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第122-123页 |
