AIF基因敲除鼠的构建及在听神经病等耳聋疾病中的应用
| 缩略语表 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 文献回顾 | 第15-20页 |
| 第一部分 AIF基因突变的发现及定位 | 第20-26页 |
| 1 临床病例资料 | 第20-23页 |
| 1.1 家系资料 | 第20-23页 |
| 1.2 遗传特点 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-24页 |
| 2.1 罗氏NimbleGen芯片外显子测序 | 第23-24页 |
| 2.2 Solexa测序 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 第二部分 AIF-Loxp模型鼠的构建 | 第26-40页 |
| 1 基因敲除实验总体设计 | 第27-30页 |
| 1.1 基因打靶实验技术 | 第28页 |
| 1.2 设计载体过程中的基本原则 | 第28-29页 |
| 1.3 载体总体设计方案 | 第29-30页 |
| 2 实验载体及目标动物 | 第30页 |
| 3 主要试剂和实验仪器 | 第30-31页 |
| 3.1 试剂 | 第30-31页 |
| 3.2 实验仪器 | 第31页 |
| 4 技术方法 | 第31-36页 |
| 4.1 BAC的提取 | 第31-32页 |
| 4.2 重组质粒的提取 | 第32页 |
| 4.3 BAC转化到EL350细胞中 | 第32页 |
| 4.4 培养胚胎干细胞并筛选打靶细胞 | 第32-34页 |
| 4.5 嵌合体小鼠的获取及其子代鼠PCR鉴定 | 第34-36页 |
| 5 结果 | 第36-38页 |
| 6 讨论 | 第38-40页 |
| 第三部分 AIF条件性敲除鼠的获得和培育 | 第40-53页 |
| 1 实验动物 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-47页 |
| 3 结果 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 第四部分 AIF条件性敲除鼠表型分析 | 第53-74页 |
| 1 实验动物 | 第53页 |
| 1.2 实验试剂 | 第53页 |
| 1.3 实验仪器 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-56页 |
| 2.1 ABR检测 | 第53-54页 |
| 2.2 小鼠耳蜗冰冻切片 | 第54页 |
| 2.3 耳蜗组织切片的HE染色 | 第54-55页 |
| 2.4 耳蜗冰冻组织切片免疫荧光染色方法 | 第55-56页 |
| 2.5 小鼠基底膜铺片鬼笔环肽染色 | 第56页 |
| 3 表型分析：基因敲除动物的生长发育和听力学改变 | 第56-71页 |
| 3.1 生殖能力 | 第56-57页 |
| 3.2 发育情况 | 第57-58页 |
| 3.3 听力学结果 | 第58-60页 |
| 3.4 螺旋神经元发育情况 | 第60-69页 |
| 3.5 毛细胞发育情况 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 小结 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-90页 |
| 个人简历和研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
