| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表(ABBREVIATIONS) | 第10-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 循环肿瘤细胞的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2 循环肿瘤细胞的富集方法 | 第15-17页 |
| 1.2.1 物理富集方法 | 第16页 |
| 1.2.2 生物化学富集方法 | 第16-17页 |
| 1.3 CTCs的检测方法 | 第17-20页 |
| 1.4 富集与检测技术结合 | 第20页 |
| 1.5 微流控芯片的介绍 | 第20-22页 |
| 1.5.1 微流控芯片的概念 | 第20-21页 |
| 1.5.2 微流控芯片的材料 | 第21页 |
| 1.5.3 微流控芯片的制作方法 | 第21页 |
| 1.5.4 微流控芯片在CTC检测中的应用 | 第21-22页 |
| 1.6 CTCs分子肿瘤标志物 | 第22-23页 |
| 1.7 阿霉素 | 第23-24页 |
| 第2章 材料和方法 | 第24-40页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.3 细胞实验 | 第26-28页 |
| 2.3.1 细胞复苏 | 第26页 |
| 2.3.2 细胞换液 | 第26-27页 |
| 2.3.3 细胞传代 | 第27页 |
| 2.3.4 细胞冻存 | 第27-28页 |
| 2.4 微流控芯片的制作 | 第28-29页 |
| 2.4.1 洗涤玻片 | 第28页 |
| 2.4.2 PDMS胶制备 | 第28页 |
| 2.4.3 芯片粘合 | 第28-29页 |
| 2.5 微流控基底进行量子点和抗体的修饰 | 第29-30页 |
| 2.5.1 微流控基底量子点修饰 | 第29页 |
| 2.5.2 一抗修饰 | 第29页 |
| 2.5.3 荧光二抗的修饰 | 第29-30页 |
| 2.6 乳腺癌细胞的捕获及捕获条件的优化 | 第30-32页 |
| 2.6.1 抗体孵育时间的优化 | 第30页 |
| 2.6.2 最佳流速的选择 | 第30-31页 |
| 2.6.3 微流控孔道的不同纹路对肿瘤细胞捕获的影响 | 第31页 |
| 2.6.4 微流控基底的粗糙度对肿瘤细胞捕获的影响 | 第31页 |
| 2.6.5 细胞捕获后孵育时间的筛选 | 第31-32页 |
| 2.6.6 条件优化后模拟肿瘤细胞的捕获 | 第32页 |
| 2.7 乳腺癌细胞捕获后进行释放的方法 | 第32页 |
| 2.8 乳腺癌细胞捕获后的再培养 | 第32-33页 |
| 2.9 阿霉素处理正常和再培养的乳腺癌细胞MDA-MB-231并收集 | 第33-34页 |
| 2.9.1 乳腺癌细胞的培养 | 第33页 |
| 2.9.2 阿霉素处理乳腺癌细胞后利用微流控进行捕获 | 第33-34页 |
| 2.9.3 阿霉素处理乳腺癌细胞并收集 | 第34页 |
| 2.10 提取四组实验细胞内总的RNA并检测 | 第34-36页 |
| 2.10.1 提取RNA的方法如下 | 第34-35页 |
| 2.10.2 提取RNA的质量检测 | 第35-36页 |
| 2.11 RNA反转录合成cDNA | 第36页 |
| 2.12 对四组乳腺癌细胞MDA-MB-231中目的基因表达水平分析 | 第36-40页 |
| 2.12.1 RT-PCR检测4组实验细胞中目的基因表达水平 | 第37-38页 |
| 2.12.2 利用QRT-PCR对4组实验细胞中目的基因进行相对定量 | 第38-40页 |
| 第3章 实验结果 | 第40-58页 |
| 3.1 微流控芯片装置 | 第40-42页 |
| 3.1.1 微流控芯片组成 | 第40-41页 |
| 3.1.2 微流控芯片基底修饰 | 第41页 |
| 3.1.3 抗体修饰结果 | 第41-42页 |
| 3.2 CTCs捕获条的件优化 | 第42-48页 |
| 3.2.1 抗体孵育时间的优化结果 | 第42-43页 |
| 3.2.2 最佳流速的选择结果 | 第43-44页 |
| 3.2.3 微流控孔道的纹路对肿瘤细胞捕获的影响 | 第44页 |
| 3.2.4 微流控基底粗糙度对肿瘤细胞捕获的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.5 细胞捕获后孵育时间的筛选结果 | 第45-47页 |
| 3.2.6 模拟肿瘤细胞的捕获结果 | 第47-48页 |
| 3.3 细胞捕获后释放的结果 | 第48-50页 |
| 3.3.1 直接利用高速冲洗的方法得到的结果 | 第48页 |
| 3.3.2 直接利用胰酶消化细胞的释放方法 | 第48-49页 |
| 3.3.3 胰酶消化和高流速冲洗相结合的释放方法 | 第49-50页 |
| 3.4 细胞捕获后再培养结果 | 第50页 |
| 3.5 微流控捕获经阿霉素处理的MDA-MB-231细胞的结果 | 第50-51页 |
| 3.6 对四组乳腺癌细胞MDA-MB-231中目的基因表达水平分析 | 第51-58页 |
| 3.6.1 四组细胞RNA提取后电泳结果 | 第51-52页 |
| 3.6.2 RT-PCR检测4组实验细胞中目的基因表达水平 | 第52-55页 |
| 3.6.3 利用Q-PCR对4组实验细胞中目的基因进行相对定量 | 第55-58页 |
| 第4章 分析与讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 硕士期间发表论文 | 第65页 |
