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玉米NAC膜结合转录因子基因克隆及表达调控研究

符号说明第5-10页
中文摘要第10-13页
Abstract第13-16页
1 前言第17-36页
    1.1 植物转录因子第17-27页
        1.1.1 植物转录因子的概念第17页
        1.1.2 转录因子的结构特征第17-19页
        1.1.3 植物常见转录因子家族第19页
        1.1.4 转录因子的研究技术第19-24页
        1.1.5 转录因子的功能研究方法第24-27页
    1.2 NAC转录因子的研究进展第27-32页
        1.2.1 NAC转录因子的分类与结构特征第27-28页
        1.2.2 NAC转录因子的生物学功能第28-32页
    1.3 NAC膜结合转录因子的研究进展第32-35页
        1.3.1 NAC膜结合转录因子的概念及结构特征第32-33页
        1.3.2 NAC膜结合转录因子功能研究第33-35页
    1.4 本研究的目的意义第35-36页
2 材料方法第36-60页
    2.1 材料第36-44页
        2.1.1 植物材料及培养条件第36页
        2.1.2 实验生化试剂及酶第36页
        2.1.3 主要的仪器设备第36页
        2.1.4 植物培养所需材料第36页
        2.1.5 菌株和载体第36-37页
        2.1.6 常用试剂和培养基配制第37-41页
        2.1.7 实验中用到的引物序列如下第41-44页
    2.2 实验方法第44-60页
        2.2.1 植物RNA提取方法(TRIzol法)第44页
        2.2.2 总RNA定量测定与电泳检测第44页
        2.2.3 cDNA第一链的合成第44页
        2.2.4 改良的CTAB法提取植物DNA第44-45页
        2.2.5 普通PCR扩增体系及程序第45-46页
        2.2.6 半定量RT-PCR扩增体系及程序第46-47页
        2.2.7 实时定量Real time-PCR扩增体系及程序第47-48页
        2.2.8 基于Gateway系统的载体构建方法第48-49页
        2.2.9 琼脂糖凝胶DNA片段回收第49页
        2.2.10 大肠杆菌质粒提取第49页
        2.2.11 拟南芥原生质体的分离及PEG介导转化第49-50页
        2.2.12 酵母转录激活实验方法第50-51页
        2.2.13 大肠杆菌感受态制备(无菌操作)第51页
        2.2.14 大肠杆菌转化第51-52页
        2.2.15 农杆菌感受态的制备(无菌操作)第52页
        2.2.16 农杆菌转化(无菌操作)第52页
        2.2.17 花序侵染法转化拟南芥第52-53页
        2.2.18 拟南芥种子的表面消毒灭菌以及培养基培养(无菌操作)第53页
        2.2.19 拟南芥播种第53页
        2.2.20 转基因植株阳性植株以及纯系筛选第53页
        2.2.21 非生物胁迫和激素处理玉米B73材料第53-54页
        2.2.22 组织特异性表达材料第54页
        2.2.23 大肠杆菌质粒大量制备方法第54-55页
        2.2.24 过氧化氢胁迫处理拟南芥方法第55页
        2.2.25 电泳迁移率实验(EMSA)第55-56页
        2.2.26 甲苯胺蓝染色和间苯三酚染色方法第56页
        2.2.27 RNA原位杂交方法第56-59页
        2.2.28 统计分析第59-60页
3 结果与分析第60-92页
    3.1 玉米NAC膜结合转录因子的分离鉴定与特征分析第60-79页
        3.1.1 玉米NAC膜结合转录因子的筛选与序列分析第60-61页
        3.1.2 生物信息学分析第61-64页
        3.1.3 ZmNTLs基因克隆第64-65页
        3.1.4 转录激活活性分析第65-67页
        3.1.5 亚细胞定位结果分析第67-69页
        3.1.6 ZmNTLs转录因子的组织定位模式分析第69-70页
        3.1.7 ZmNTLs转录因子的非生物胁迫响应模式分析第70-72页
        3.1.8 ZmNTLs转录因子对植物激素的响应模式分析第72-76页
        3.1.9 ZmNTL转录谱特征分析第76-77页
        3.1.10 三个ZmNTL拟南芥过表达系对过氧化氢胁迫的响应第77-79页
    3.2 玉米ZmNTL1的功能分析第79-87页
        3.2.1 水淹胁迫下植株发育表型观察第79-80页
        3.2.2 水淹胁迫下基因表达变化分析第80-81页
        3.2.3 拟南芥AtRbohD过表达系构建第81-82页
        3.2.4 水淹胁迫下拟南芥ZmNTL1-△TM过表达系和rbohd突变体表型观察第82-84页
        3.2.5 ZmNTL1-△TM恢复系构建第84页
        3.2.6 ZmNTL1-△TM拟南芥同源基因突变体以及恢复系水淹胁迫下表型鉴定第84-85页
        3.2.7 凝胶阻滞实验第85-86页
        3.2.8 ZmNTL1-GFP转基因植株的获得第86-87页
        3.2.9 ZmNTL1玉米突变体筛选第87页
    3.3 玉米ZmNTL2的功能分析第87-92页
        3.3.1 植株发育观察第87-88页
        3.3.2 甲苯胺蓝和间苯三酚染色第88页
        3.3.3 RNA原位杂交第88-90页
        3.3.4 木质素相关marker基因检测第90页
        3.3.5 ZmNTL2玉米突变体筛选第90-92页
4 讨论第92-97页
    4.1 ZmNTL的特征第92-93页
    4.2 ZmNTLs基因的组织定位模式和对非生物胁迫、激素的响应第93页
    4.3 ZmNTLs基因对过氧化氢胁迫的响应第93-94页
    4.4 ZmNTL1对水淹胁迫的响应第94-96页
    4.5 ZmNTL2对木质素的调控第96-97页
5 结论第97-98页
参考文献第98-109页
致谢第109-110页
攻读学位期间发表的论文及成果第110页

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