符号说明 | 第5-10页 |
中文摘要 | 第10-13页 |
Abstract | 第13-16页 |
1 前言 | 第17-36页 |
1.1 植物转录因子 | 第17-27页 |
1.1.1 植物转录因子的概念 | 第17页 |
1.1.2 转录因子的结构特征 | 第17-19页 |
1.1.3 植物常见转录因子家族 | 第19页 |
1.1.4 转录因子的研究技术 | 第19-24页 |
1.1.5 转录因子的功能研究方法 | 第24-27页 |
1.2 NAC转录因子的研究进展 | 第27-32页 |
1.2.1 NAC转录因子的分类与结构特征 | 第27-28页 |
1.2.2 NAC转录因子的生物学功能 | 第28-32页 |
1.3 NAC膜结合转录因子的研究进展 | 第32-35页 |
1.3.1 NAC膜结合转录因子的概念及结构特征 | 第32-33页 |
1.3.2 NAC膜结合转录因子功能研究 | 第33-35页 |
1.4 本研究的目的意义 | 第35-36页 |
2 材料方法 | 第36-60页 |
2.1 材料 | 第36-44页 |
2.1.1 植物材料及培养条件 | 第36页 |
2.1.2 实验生化试剂及酶 | 第36页 |
2.1.3 主要的仪器设备 | 第36页 |
2.1.4 植物培养所需材料 | 第36页 |
2.1.5 菌株和载体 | 第36-37页 |
2.1.6 常用试剂和培养基配制 | 第37-41页 |
2.1.7 实验中用到的引物序列如下 | 第41-44页 |
2.2 实验方法 | 第44-60页 |
2.2.1 植物RNA提取方法(TRIzol法) | 第44页 |
2.2.2 总RNA定量测定与电泳检测 | 第44页 |
2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第44页 |
2.2.4 改良的CTAB法提取植物DNA | 第44-45页 |
2.2.5 普通PCR扩增体系及程序 | 第45-46页 |
2.2.6 半定量RT-PCR扩增体系及程序 | 第46-47页 |
2.2.7 实时定量Real time-PCR扩增体系及程序 | 第47-48页 |
2.2.8 基于Gateway系统的载体构建方法 | 第48-49页 |
2.2.9 琼脂糖凝胶DNA片段回收 | 第49页 |
2.2.10 大肠杆菌质粒提取 | 第49页 |
2.2.11 拟南芥原生质体的分离及PEG介导转化 | 第49-50页 |
2.2.12 酵母转录激活实验方法 | 第50-51页 |
2.2.13 大肠杆菌感受态制备(无菌操作) | 第51页 |
2.2.14 大肠杆菌转化 | 第51-52页 |
2.2.15 农杆菌感受态的制备(无菌操作) | 第52页 |
2.2.16 农杆菌转化(无菌操作) | 第52页 |
2.2.17 花序侵染法转化拟南芥 | 第52-53页 |
2.2.18 拟南芥种子的表面消毒灭菌以及培养基培养(无菌操作) | 第53页 |
2.2.19 拟南芥播种 | 第53页 |
2.2.20 转基因植株阳性植株以及纯系筛选 | 第53页 |
2.2.21 非生物胁迫和激素处理玉米B73材料 | 第53-54页 |
2.2.22 组织特异性表达材料 | 第54页 |
2.2.23 大肠杆菌质粒大量制备方法 | 第54-55页 |
2.2.24 过氧化氢胁迫处理拟南芥方法 | 第55页 |
2.2.25 电泳迁移率实验(EMSA) | 第55-56页 |
2.2.26 甲苯胺蓝染色和间苯三酚染色方法 | 第56页 |
2.2.27 RNA原位杂交方法 | 第56-59页 |
2.2.28 统计分析 | 第59-60页 |
3 结果与分析 | 第60-92页 |
3.1 玉米NAC膜结合转录因子的分离鉴定与特征分析 | 第60-79页 |
3.1.1 玉米NAC膜结合转录因子的筛选与序列分析 | 第60-61页 |
3.1.2 生物信息学分析 | 第61-64页 |
3.1.3 ZmNTLs基因克隆 | 第64-65页 |
3.1.4 转录激活活性分析 | 第65-67页 |
3.1.5 亚细胞定位结果分析 | 第67-69页 |
3.1.6 ZmNTLs转录因子的组织定位模式分析 | 第69-70页 |
3.1.7 ZmNTLs转录因子的非生物胁迫响应模式分析 | 第70-72页 |
3.1.8 ZmNTLs转录因子对植物激素的响应模式分析 | 第72-76页 |
3.1.9 ZmNTL转录谱特征分析 | 第76-77页 |
3.1.10 三个ZmNTL拟南芥过表达系对过氧化氢胁迫的响应 | 第77-79页 |
3.2 玉米ZmNTL1的功能分析 | 第79-87页 |
3.2.1 水淹胁迫下植株发育表型观察 | 第79-80页 |
3.2.2 水淹胁迫下基因表达变化分析 | 第80-81页 |
3.2.3 拟南芥AtRbohD过表达系构建 | 第81-82页 |
3.2.4 水淹胁迫下拟南芥ZmNTL1-△TM过表达系和rbohd突变体表型观察 | 第82-84页 |
3.2.5 ZmNTL1-△TM恢复系构建 | 第84页 |
3.2.6 ZmNTL1-△TM拟南芥同源基因突变体以及恢复系水淹胁迫下表型鉴定 | 第84-85页 |
3.2.7 凝胶阻滞实验 | 第85-86页 |
3.2.8 ZmNTL1-GFP转基因植株的获得 | 第86-87页 |
3.2.9 ZmNTL1玉米突变体筛选 | 第87页 |
3.3 玉米ZmNTL2的功能分析 | 第87-92页 |
3.3.1 植株发育观察 | 第87-88页 |
3.3.2 甲苯胺蓝和间苯三酚染色 | 第88页 |
3.3.3 RNA原位杂交 | 第88-90页 |
3.3.4 木质素相关marker基因检测 | 第90页 |
3.3.5 ZmNTL2玉米突变体筛选 | 第90-92页 |
4 讨论 | 第92-97页 |
4.1 ZmNTL的特征 | 第92-93页 |
4.2 ZmNTLs基因的组织定位模式和对非生物胁迫、激素的响应 | 第93页 |
4.3 ZmNTLs基因对过氧化氢胁迫的响应 | 第93-94页 |
4.4 ZmNTL1对水淹胁迫的响应 | 第94-96页 |
4.5 ZmNTL2对木质素的调控 | 第96-97页 |
5 结论 | 第97-98页 |
参考文献 | 第98-109页 |
致谢 | 第109-110页 |
攻读学位期间发表的论文及成果 | 第110页 |