| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 综述 | 第11-19页 |
| 1.1 PE家族蛋白 | 第11页 |
| 1.2 PE家族蛋白定位和分泌 | 第11-12页 |
| 1.3 PE家族蛋白的表达 | 第12-13页 |
| 1.4 PE家族蛋白影响结核分枝杆菌的菌落形态和形态 | 第13页 |
| 1.5 PE家族蛋白的功能 | 第13-16页 |
| 1.5.1 PE家族蛋白可能作为候选疫苗 | 第14页 |
| 1.5.2 PE家族的蛋白可能作为脂酶发挥功能 | 第14-15页 |
| 1.5.3 PE家族的蛋白通过形成复合物发挥功能 | 第15-16页 |
| 1.6 PE家族和PE13 | 第16-19页 |
| 第2章 前言 | 第19-21页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第21-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 3.1.1 实验菌株、质粒和细胞 | 第21页 |
| 3.1.2 培养基和主要试剂 | 第21-23页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 3.2 实验方法 | 第23-33页 |
| 3.2.1 结核分枝杆菌H37RV基因组的提取：CTAB法 | 第23页 |
| 3.2.2 结核分枝杆菌PE13基因、R1195、PCR引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| 3.2.3 结核分枝杆菌PE13基因、Rv1195扩增 | 第24页 |
| 3.2.4 PCR扩增产物的柱式胶回收纯化 | 第24页 |
| 3.2.5 Rv1195基因的TA克隆 | 第24页 |
| 3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第24-25页 |
| 3.2.7 质粒的提取 | 第25页 |
| 3.2.8 Rv1195基因亚克隆至pNIT-myc质粒,并转化至大肠杆菌DH5a保种 | 第25页 |
| 3.2.9 Rv1195基因重组耻垢分枝杆菌mc2155的构建和鉴定 | 第25-26页 |
| 3.2.10 重组质粒在耻垢分枝杆菌中的表达及验证 | 第26-27页 |
| 3.2.11 重组耻垢分枝菌菌落形态，滑动能力，生物膜以及脂肪酸组成的分析 | 第27-28页 |
| 3.2.12 Rv1195对重组耻垢分枝杆菌生长的影响 | 第28页 |
| 3.2.13 启动子活性检测 | 第28-29页 |
| 3.2.14 重组耻垢分枝杆菌巨噬细胞内存活分析 | 第29页 |
| 3.2.15 双琼脂法测Rv1195对重组耻垢分枝杆菌在氧化压力环境下的影响 | 第29页 |
| 3.2.16 双琼脂法测Rv1195对重组耻垢分枝杆菌抵抗SDS，H2O2的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.17 巨噬细胞THP-1 存活实验 | 第30页 |
| 3.2.18 通过荧光显微镜观察THP-1 被重组耻垢分枝杆菌侵染后的细胞凋亡 | 第30-31页 |
| 3.2.19 检测THP-1 被重组耻垢分枝杆菌侵染后细胞因子表达的变化 | 第31-32页 |
| 3.2.20 检测抑制剂（TPCK，PD98059，SB202190）处理后细胞因子表达的变 | 第32页 |
| 3.2.21 数据处理 | 第32-33页 |
| 第4章 结果与分析 | 第33-51页 |
| 4.1 Rv1195基因的PCR扩增和鉴定以及重组耻垢分枝杆菌杆菌阳性克隆筛选 | 第33页 |
| 4.2 Rv1195（PE13）重组蛋白pGEX-6P2Rv1195并表达蛋白 | 第33-34页 |
| 4.3 在耻垢分枝杆菌中构建并鉴定重组质粒pNlT-Rv1195 | 第34-35页 |
| 4.4 诱导Rv1195基因在重组耻垢分枝杆菌中表达,并通过Westesn Blot鉴定重组蛋白 | 第35页 |
| 4.5 Rv1195定位在耻垢分枝杆菌细胞表面 | 第35-36页 |
| 4.6 Rv1195基因的表达没有影响重组耻垢分枝杆菌的生长 | 第36-37页 |
| 4.7 Rv1195对重组耻垢分枝杆菌的菌体形态有影响 | 第37页 |
| 4.8 Rv1195对重组耻垢分枝杆菌菌落形态和生物膜形成有影响 | 第37-38页 |
| 4.9 滑动实验 | 第38-39页 |
| 4.10 Ms_Rv1195重组耻垢分枝杆菌脂肪酸含量检测 | 第39页 |
| 4.11 Rv1195增强耻垢分枝杆菌对压力环境（SDS ,H2O2,Low pH）的耐受 | 第39-40页 |
| 4.12 Rv1195增强耻垢分枝杆菌对氧化剂联氨的耐受 | 第40-41页 |
| 4.13 Rv1195增强对耻垢分枝杆菌对万古霉素的耐受和卷曲霉素，诺氟沙新 的敏感 | 第41-42页 |
| 4.14 Rv1195启动子活性在压力环境下增强 | 第42-43页 |
| 4.15 Rv1195启动子活性在压力环境下增强 | 第43页 |
| 4.16 Rv1195增强耻垢分枝杆菌在巨噬细胞（RAW246.7,THP-1）中的存活 | 第43-44页 |
| 4.17 Rv1195对巨噬细胞内细胞因子有影响 | 第44-45页 |
| 4.18 通过Western blot检测SOCS3在蛋白水平的变化 | 第45-46页 |
| 4.19 Rv1195通过MAPKs和NF-κB信号通路影响IL-6 和IL-1β 的分泌 | 第46-47页 |
| 4.20 乳酸脱氢酶法LDH证明Rv1195影响细胞死亡 | 第47页 |
| 4.21 抑制剂处理后影响巨噬细胞与细胞死亡有关因子BNIP3, Bcl-rambo, TNF-α 的表达 | 第47-49页 |
| 4.22 Rv1195可能与细胞凋亡有关 | 第49-51页 |
| 第5章 结论与展望 | 第51-55页 |
| 5.1 实验结论 | 第51页 |
| 5.2 讨论与分析 | 第51-54页 |
| 5.3 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 在硕士期间撰写发表的文章 | 第61页 |
