| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 小麦转基因技术研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 直接转化法 | 第13-14页 |
| 1.1.2 农杆菌转化法 | 第14-15页 |
| 1.2 农杆菌转化分子机制 | 第15-19页 |
| 1.2.1 农杆菌对受体的识别并诱导毒性区基因的表达 | 第16-17页 |
| 1.2.2 T-DNA的加工及转运 | 第17-18页 |
| 1.2.3 T-DNA在植物细胞内的转运、整合及表达 | 第18-19页 |
| 1.3 农杆菌介导的小麦遗传转化影响因素 | 第19-21页 |
| 1.3.1 农杆菌菌株及表达载体的构建 | 第19页 |
| 1.3.2 毒性区基因活化诱导物的添加 | 第19-20页 |
| 1.3.3 受体基因型及其生理状态 | 第20页 |
| 1.3.4 外植体的预培养 | 第20-21页 |
| 1.3.5 农杆菌浸染条件 | 第21页 |
| 1.4 转基因植物筛选标记基因研究进展 | 第21-24页 |
| 1.4.1 传统筛选标记基因的利用 | 第21-22页 |
| 1.4.2 正向筛选标记基因的利用 | 第22-23页 |
| 1.4.3 筛选标记基因的剔除 | 第23-24页 |
| 1.5 农杆菌介导的小麦遗传转化存在的问题及展望 | 第24页 |
| 1.6 小麦悬浮细胞培养研究进展 | 第24-25页 |
| 1.7 小麦赤霉病研究进展 | 第25-28页 |
| 1.7.1 小麦赤霉病的危害 | 第25-26页 |
| 1.7.2 小麦赤霉病的防治策略 | 第26页 |
| 1.7.3 小麦抗赤霉病转基因研究进展 | 第26-28页 |
| 1.8 研究目的及意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 菌株及质粒载体 | 第29页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 DNA及RNA提取试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2.1.4 实验所用培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.5 小麦材料 | 第31页 |
| 2.1.6 PCR引物 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 菌体PCR鉴定农杆菌转化子 | 第32-33页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的小麦愈伤转化 | 第33-34页 |
| 2.2.3 农杆菌转化后愈伤组织的筛选、壮苗及移栽 | 第34页 |
| 2.2.4 CTAB法提取小麦基因组DNA | 第34-35页 |
| 2.2.5 抗性植株以及转基因植株PCR鉴定 | 第35页 |
| 2.2.6 转基因植株RT-PCR鉴定 | 第35-37页 |
| 2.2.7 单花接种鉴定转基因小麦赤霉病抗性 | 第37-38页 |
| 2.2.8 小麦悬浮细胞培养 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-62页 |
| 3.1 菌体PCR鉴定农杆菌转化子 | 第40页 |
| 3.2 农杆菌介导的小麦转基因植株的获得 | 第40-41页 |
| 3.3 小麦愈伤预培养时间的确定 | 第41页 |
| 3.4 农杆菌浸染条件对扬麦158转化的影响 | 第41-43页 |
| 3.5 基因型对农杆菌转化的影响 | 第43-44页 |
| 3.6 不同筛选体系对农杆菌转化的影响 | 第44-45页 |
| 3.7 Bar基因为筛选标记基因转基因植株的分子鉴定 | 第45-51页 |
| 3.7.1 Bar基因为筛选标记基因转基因植株T0 代PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 3.7.2 扬麦158转Ech42 基因后代PCR鉴定 | 第46-48页 |
| 3.7.3 扬麦158转Hvchi-D2-His基因后代PCR鉴定 | 第48-51页 |
| 3.7.4 Bar基因为筛选标记基因转基因植株T4 代RT-PCR鉴定 | 第51页 |
| 3.8 Pmi基因为筛选标记基因转基因植株的分子鉴定 | 第51-56页 |
| 3.8.1 Pmi基因为筛选标记基因转基因植株T0 代的分子鉴定 | 第51-53页 |
| 3.8.2 Pmi基因为筛选标记基因转基因植株后代分子鉴定 | 第53-56页 |
| 3.9 单花接种鉴定转基因扬麦158赤霉病抗性 | 第56-58页 |
| 3.10 小麦悬浮细胞系的建立 | 第58-62页 |
| 3.10.1 不同叶基切段愈伤组织的状态 | 第58-60页 |
| 3.10.2 胚性愈伤组织的获得 | 第60-61页 |
| 3.10.3 悬浮培养 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| 4.1 小麦外植体的预培养 | 第62页 |
| 4.2 农杆菌浸染条件与转化效率 | 第62页 |
| 4.3 农杆菌介导的小麦遗传转化基因型的限制 | 第62-63页 |
| 4.4 筛选体系的优化 | 第63页 |
| 4.5 筛选标记基因的剔除 | 第63-64页 |
| 4.6 小麦悬浮细胞系建立的条件 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
