| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第18-36页 |
| 1.1 类胡萝卜素的简介 | 第18-19页 |
| 1.2 类胡萝卜素在各领域的应用 | 第19-21页 |
| 1.2.1 类胡萝卜素在饲料中的应用 | 第19-21页 |
| 1.2.2 类胡萝卜素在食品中的应用 | 第21页 |
| 1.3 类胡萝卜素的功能及对人体的生理作用 | 第21-25页 |
| 1.3.1 着色功能 | 第21-22页 |
| 1.3.2 增强免疫力 | 第22页 |
| 1.3.3 促进生长和成熟,改善卵质 | 第22页 |
| 1.3.4 抗氧化剂和脂质过氧化的抑制剂 | 第22-23页 |
| 1.3.5 增强对低氧的耐受性 | 第23页 |
| 1.3.6 抗紫外辐射的光保护作用 | 第23页 |
| 1.3.7 具有维生素A活性 | 第23-24页 |
| 1.3.8 类胡萝卜素对人体的生理作用 | 第24-25页 |
| 1.4 国内外利用微生物发酵生产β-胡萝卜素的研究进展 | 第25-30页 |
| 1.4.1 利用霉菌发酵生产类胡萝卜素 | 第25-27页 |
| 1.4.2 利用红酵母类微生物生产类胡萝卜素 | 第27-28页 |
| 1.4.3 从光合细菌中提取类胡萝卜素 | 第28-29页 |
| 1.4.4 从藻类生物中提取类胡萝卜素 | 第29页 |
| 1.4.5 基因工程菌生产类胡萝卜素 | 第29-30页 |
| 1.5 不同微生物生产类胡萝卜素特点比较 | 第30页 |
| 1.6 酵母应对环境胁迫的调节机制 | 第30-31页 |
| 1.7 类胡萝卜素合成关键酶基因的概述 | 第31页 |
| 1.8 类胡萝卜素的提取方法 | 第31-33页 |
| 1.9 研究背景与意义 | 第33-34页 |
| 1.10 技术路线 | 第34-36页 |
| 第二章 红冬孢酵母类胡萝卜素提取及其组分分析 | 第36-44页 |
| 2.1 材料 | 第36页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第36页 |
| 2.1.2 主要试剂和培养基配方 | 第36页 |
| 2.2 方法 | 第36-38页 |
| 2.2.1 总类胡萝卜素的提取 | 第36-38页 |
| 2.2.2 类胡萝卜素分离与鉴定 | 第38页 |
| 2.3 结果和分析 | 第38-42页 |
| 2.3.1 类胡萝卜素的提取方法比较 | 第38-39页 |
| 2.3.2 类胡萝卜素的分离与定性 | 第39-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 类胡萝卜素合成关键酶基因Pdh和Lc的克隆 | 第44-58页 |
| 3.1 材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂和培养基配方 | 第44-45页 |
| 3.1.3 引物合成和测序 | 第45页 |
| 3.2 类胡萝卜素合成关键酶基因Pdh及Lc的克隆 | 第45-50页 |
| 3.2.1 红冬孢酵母YM25235总RNA的提取 | 第45-46页 |
| 3.2.2 总RNA反转录 | 第46-47页 |
| 3.2.3 Pdh和Lc全长cDNA的扩增 | 第47-48页 |
| 3.2.4 Pdh和Lc基因扩增片段回收 | 第48页 |
| 3.2.5 Pdh和Lc基因回收片段测序验证 | 第48-50页 |
| 3.4 结果与分析 | 第50-55页 |
| 3.4.1 Pdh和Lc的克隆 | 第50-55页 |
| 3.5 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 红冬孢酵母中Pdh、Lc基因功能分析 | 第58-78页 |
| 4.1 菌种与材料 | 第58-60页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂和培养基配方 | 第58-59页 |
| 4.1.3 引物 | 第59-60页 |
| 4.2 重组表达质粒pRHPdh、pRHLc的构建 | 第60-64页 |
| 4.2.1 Pdh、Lc基因的扩增 | 第60页 |
| 4.2.2 Pdh和Lc基因扩增片段回收 | 第60页 |
| 4.2.3 质粒基因片段的双酶切 | 第60-62页 |
| 4.2.4 Pdh和Lc基因与质粒pRH2034片段连接转化 | 第62-64页 |
| 4.3 Pdh和Lc基因过表达红冬孢酵母的制各 | 第64-66页 |
| 4.3.1 重组质粒转化农杆菌 | 第64-65页 |
| 4.3.2 农杆菌转化YM25235及验证 | 第65-66页 |
| 4.4 Pdh和Lc基因表达水平分析 | 第66-67页 |
| 4.4.1 红冬孢酵母半定量分析 | 第66-67页 |
| 4.4.2 实时荧光定量PCR(RT-PCR)分析 | 第67页 |
| 4.5 类胡萝卜素产物水平分析 | 第67-68页 |
| 4.5.1 类胡萝卜素的提取 | 第67页 |
| 4.5.2 类胡萝卜素定量分析 | 第67-68页 |
| 4.6 结果和分析 | 第68-75页 |
| 4.6.1 重组质粒pRHPdh、pRHLc的构建 | 第68-69页 |
| 4.6.2 转基因菌株的鉴定 | 第69-70页 |
| 4.6.3 Pdh和Lc基因mRNA表达水平分析 | 第70-72页 |
| 4.6.4 类胡萝卜素产物分析 | 第72-75页 |
| 4.6.4.1 标注曲线绘制 | 第72-73页 |
| 4.6.4.2 Pdh和Lc基因与类胡萝卜素合成的相关性分析 | 第73-75页 |
| 4.7 讨论 | 第75-78页 |
| 第五章 低温条件下类胡萝卜素合成与红冬孢酵母低温生长适应的相关性分析 | 第78-90页 |
| 5.1 材料 | 第78-79页 |
| 5.1.1 菌种 | 第78页 |
| 5.1.2 主要试剂和培养基配方 | 第78-79页 |
| 5.2 低温培养条件下过表达菌株中Pdh和Lc基因表达水平比较 | 第79页 |
| 5.3 低温培养条件下类胡萝卜素产量比较 | 第79-80页 |
| 5.4 结果和分析 | 第80-87页 |
| 5.4.1 野生型菌株YM25235中Pdh、Lc基因表达水平分析 | 第80-81页 |
| 5.4.2 过表达菌株mRNA表达水平相关性分析 | 第81-85页 |
| 5.4.3 类胡萝卜素合成水平相关性分析 | 第85-87页 |
| 5.5 讨论 | 第87-90页 |
| 第六章 总结与展望 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-102页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第102-103页 |
| 附录B 试验药品与设备 | 第103-105页 |
| B.1 主要溶液及其配制 | 第103页 |
| B.1.1 溴化乙锭溶液 | 第103页 |
| B.1.2 1%琼脂糖凝胶的配制 | 第103页 |
| B.1.3 TAE电泳缓冲液 | 第103页 |
| B.1.4 TBE电泳缓冲液 | 第103页 |
| B.2 主要仪器 | 第103-104页 |
| B.3 试剂及酶制品 | 第104-105页 |
