| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 嗜热微生物和嗜热酶 | 第12-14页 |
| 1.1.1 极端微生物及嗜热微生物 | 第12页 |
| 1.1.2 黄热厌氧芽孢杆菌 | 第12-13页 |
| 1.1.3 嗜热酶 | 第13-14页 |
| 1.2 糖苷水解酶 | 第14-15页 |
| 1.2.1 糖苷水解酶定义 | 第14页 |
| 1.2.2 糖苷水解酶的分类 | 第14页 |
| 1.2.3 糖苷水解酶的命名 | 第14页 |
| 1.2.4 糖苷水解酶家族 | 第14-15页 |
| 1.3 β-葡萄糖苷酶 | 第15-20页 |
| 1.3.1 β-葡萄糖苷酶简介 | 第15页 |
| 1.3.2 β-葡萄糖苷酶的来源 | 第15页 |
| 1.3.3 β-葡萄糖苷酶的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.4 β-葡萄糖苷酶的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.5 β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第17页 |
| 1.3.6 β-葡萄糖苷酶的相对分子质量 | 第17页 |
| 1.3.7 β-葡萄糖苷酶的底物特异性 | 第17页 |
| 1.3.8 β-葡萄糖苷酶的最适pH和pH稳定性 | 第17-18页 |
| 1.3.9 β-葡萄糖苷酶的最适温度及温度稳定性 | 第18页 |
| 1.3.10 β-葡萄糖苷酶动力学参数 | 第18页 |
| 1.3.11 β-葡萄糖苷酶的获得 | 第18页 |
| 1.3.12 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第18-20页 |
| 1.4 大豆异黄酮 | 第20-21页 |
| 1.4.1 大豆异黄酮简介 | 第20页 |
| 1.4.2 大豆异黄酮的应用 | 第20页 |
| 1.4.3 酶法制备大豆异黄酮苷元 | 第20-21页 |
| 1.5 β-半乳糖苷酶 | 第21-22页 |
| 1.5.1 β-半乳糖苷酶概述及来源 | 第21页 |
| 1.5.2 耐热β-半乳糖苷酶家族分类 | 第21页 |
| 1.5.3 β-半乳糖苷酶的催化性质 | 第21-22页 |
| 1.5.4 β-半乳糖苷酶的生物学特性 | 第22页 |
| 1.5.5 β-半乳糖苷酶的应用 | 第22页 |
| 1.6 α-半乳糖苷酶 | 第22-23页 |
| 1.6.1 α-半乳糖苷酶简介 | 第22-23页 |
| 1.6.2 α-半乳糖苷酶的来源 | 第23页 |
| 1.6.3 α-半乳糖苷酶的分类和特性 | 第23页 |
| 1.6.4 α-半乳糖苷酶的应用 | 第23页 |
| 1.7 包涵体复性 | 第23-25页 |
| 1.7.1 包涵体简介 | 第23-24页 |
| 1.7.2 包涵体复性的步骤 | 第24页 |
| 1.7.3 影响包涵体复性的因素 | 第24-25页 |
| 1.8 有机溶剂耐受酶 | 第25页 |
| 1.9 本研究的目的意义及主要研究内容 | 第25-27页 |
| 1.9.1 研究目的 | 第25-26页 |
| 1.9.2 研究意义 | 第26页 |
| 1.9.3 研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 β-葡萄糖苷酶BgIP的重组表达和酶学性质研究 | 第27-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.4 培养基及溶剂配置 | 第28-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 家族分类和保守序列分析 | 第30页 |
| 2.2.2 黄热厌氧芽孢杆菌云南亚种的培养和基因组提取 | 第30-31页 |
| 2.2.3 pET22b-bglp重组质粒的构建 | 第31页 |
| 2.2.4 重组蛋白BglP的表达和纯化 | 第31页 |
| 2.2.5 β-葡萄糖苷酶酶活测定 | 第31-32页 |
| 2.2.6 最适反应温度和温度稳定性测定 | 第32页 |
| 2.2.7 最适pH和pH稳定性测定 | 第32页 |
| 2.2.8 动力学参数测定 | 第32-33页 |
| 2.2.9 金属离子和化学试剂对BglP酶活力的影响 | 第33页 |
| 2.2.10 BglP的底物特异性测定 | 第33页 |
| 2.2.11 各类糖对BglP酶活力的影响 | 第33页 |
| 2.2.12 高浓度葡萄糖和木糖对BglP酶活力的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.13 葡萄糖对BglP温度稳定性的影响 | 第34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-48页 |
| 2.3.1 BglP的氨基酸序列分析 | 第34-36页 |
| 2.3.2 重组质粒pET22b-bglp的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.3 BglP的诱导表达和纯化 | 第37页 |
| 2.3.4 BglP的最适反应温度和温度稳定性 | 第37-39页 |
| 2.3.5 BglP的最适pH和pH稳定性 | 第39-40页 |
| 2.3.6 BglP的底物特异性和比活 | 第40-42页 |
| 2.3.7 BglP的酶动力学 | 第42-43页 |
| 2.3.8 金属离子和化学试剂对BglP酶活的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.9 寡糖对BglP酶活力的影响 | 第44-46页 |
| 2.3.10 葡萄糖对BglP温度稳定性的影响 | 第46-48页 |
| 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 β-葡萄糖苷酶BglP在制备大豆异黄酮苷元和提高甘蔗渣转化率方面的应用研究 | 第49-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 3.2.1 大豆异黄酮有效成分的提取 | 第49页 |
| 3.2.2 色谱条件 | 第49页 |
| 3.2.3 BglP水解大豆异黄酮能力的初步确定 | 第49-50页 |
| 3.2.4 大豆异黄酮酶解条件的优化 | 第50页 |
| 3.2.5 甘蔗渣的制备 | 第50-51页 |
| 3.2.6 BglP对甘蔗渣转化率的影响 | 第51页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第51-56页 |
| 3.3.1 BglP酶解大豆异黄酮能力的确定 | 第51-52页 |
| 3.3.2 BglP酶解大豆异黄酮最优条件的确定 | 第52-54页 |
| 3.3.3 BglP对甘蔗渣在高浓度葡萄糖和木糖下转化率的影响 | 第54-56页 |
| 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 β-半乳糖苷酶BgalP的重组表达及酶学性质研究 | 第57-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-58页 |
| 4.2.1 pET32a-bgalp重组质粒的构建 | 第57页 |
| 4.2.2 序列分析和家族分类 | 第57页 |
| 4.2.3 重组蛋白BgalP的表达和纯化 | 第57页 |
| 4.2.4 β-半乳糖苷酶的酶活测定 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第58-68页 |
| 4.3.1 BgalP的氨基酸序列分析 | 第58-60页 |
| 4.3.2 重组质粒pET32a-bgalp的构建 | 第60-61页 |
| 4.3.3 BgalP的诱导表达和纯化 | 第61-62页 |
| 4.3.4 BgalP的最适反应温度 | 第62页 |
| 4.3.5 BgalP的温度稳定性 | 第62-63页 |
| 4.3.6 BgalP最适反应pH | 第63-64页 |
| 4.3.7 BgalP的pH稳定性 | 第64-65页 |
| 4.3.8 金属离子对BgalP酶活力的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.9 BgalP的催化效率 | 第66-67页 |
| 4.3.10 有机溶剂对BgalP酶活的影响 | 第67-68页 |
| 本章小结 | 第68-70页 |
| 第五章 α-半乳糖苷酶AgalP的重组表达、包涵体复性及初步酶学性质研究 | 第70-81页 |
| 5.1 实验材料 | 第70页 |
| 5.1.1 菌种与质粒、主要试剂、主要仪器 | 第70页 |
| 5.1.2 溶液 | 第70页 |
| 5.2 实验方法 | 第70-72页 |
| 5.2.1 重组质粒pET32a-agalp的构建 | 第70-71页 |
| 5.2.2 序列分析和AgalP的诱导表达 | 第71页 |
| 5.2.3 AaalP蛋白可溶性表达条件的摸索 | 第71页 |
| 5.2.4 AgalP包涵体蛋白的收集 | 第71页 |
| 5.2.5 AgalP包涵体的洗涤与变性 | 第71页 |
| 5.2.6 AaalP包涵体镍柱复性和纯化 | 第71-72页 |
| 5.2.7 AgalP标准酶活性测定 | 第72页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第72-79页 |
| 5.3.1 AgalP的氨基酸序列分析 | 第72-74页 |
| 5.3.2 pET32-agalp重组质粒的构建 | 第74页 |
| 5.3.3 AgalP的诱导表达 | 第74-75页 |
| 5.3.4 AgalP可溶性表达条件的摸索 | 第75页 |
| 5.3.5 AgalP包涵体镍柱复性和纯化 | 第75-76页 |
| 5.3.6 AgalP最适反应温度和温度稳定性 | 第76-77页 |
| 5.3.7 AgalP的最适反应pH和pH稳定性 | 第77-78页 |
| 5.3.8 AgalP的动力学参数 | 第78-79页 |
| 5.3.9 金属离子和化学试剂对AgalP酶活的影响 | 第79页 |
| 本章小结 | 第79-81页 |
| 第六章 结论和展望 | 第81-83页 |
| 6.1 结论 | 第81-82页 |
| 6.2 特色与创新点 | 第82页 |
| 6.3 展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 附录 | 第97-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 研究生期间发表论文情况 | 第101页 |
