| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 水稻齿叶矮缩病毒的研究现状 | 第11-13页 |
| 1.1.1 RRSV的发生与危害 | 第11页 |
| 1.1.2 基因组结构及其功能 | 第11-12页 |
| 1.1.3 水稻齿叶矮缩病毒的分类地位 | 第12页 |
| 1.1.4 水稻齿叶矮缩病的病害症状 | 第12-13页 |
| 1.2 植物生长发育的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 植物病毒病症状的研究进展 | 第13页 |
| 1.2.2 参与植物生理调控的miR156及其主要靶基因SPL的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3 主要研究技术 | 第15-18页 |
| 1.3.1 实时荧光定量PCR | 第15-16页 |
| 1.3.2 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第16-17页 |
| 1.3.3 RNA干扰技术 | 第17页 |
| 1.3.4 酵母双杂交 | 第17-18页 |
| 1.4 实验目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 RRSV对水稻miR156靶基因表达量的影响 | 第20-29页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 提取水稻总RNA | 第20-21页 |
| 2.2.2 基因组DNA的消化 | 第21页 |
| 2.2.3 反转录 | 第21-22页 |
| 2.2.4 设计荧光定量PCR引物 | 第22页 |
| 2.2.5 筛选荧光定量PCR引物 | 第22页 |
| 2.2.6 绘制标准曲线 | 第22-23页 |
| 2.2.7 水稻miR156的靶基因OsSPL的表达量进行qPCR检测 | 第23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-27页 |
| 2.3.1 Real-time PCR引物可靠性检测 | 第23-24页 |
| 2.3.2 内参基因与目的基因标准曲线的制作 | 第24-25页 |
| 2.3.3 水稻中miR156靶基因表达量的检测 | 第25-27页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 水稻miR156靶基因OsSPL载体的构建 | 第29-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第29-35页 |
| 3.1.1 材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1.1 载体和菌株 | 第29页 |
| 3.1.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.1.3 实验器材 | 第29页 |
| 3.1.1.4 引物设计 | 第29-30页 |
| 3.1.2 方法 | 第30-35页 |
| 3.1.2.1 提取植物总RNA | 第30页 |
| 3.1.2.2 反转录 | 第30页 |
| 3.1.2.3 PCR克隆 | 第30-31页 |
| 3.1.2.4 胶回收 | 第31-32页 |
| 3.1.2.5 连接与转化 | 第32页 |
| 3.1.2.6 阳性克隆鉴定 | 第32页 |
| 3.1.2.7 试剂盒提质粒 | 第32-33页 |
| 3.1.2.8 酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.1.2.9 PXQ载体的构建 | 第33页 |
| 3.1.2.10 RNAi载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.2.11 农杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| 3.1.2.12 农杆菌转化 | 第34页 |
| 3.1.2.13 重组质粒的转农杆菌菌液PCR鉴定和酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2 结果与分析 | 第35-42页 |
| 3.2.1 目的基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 3.2.2 PXQ植物过表达载体构建与双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.3 RNAi植物表达载体的构建与双酶切鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2.4 植物表达载体转化农杆菌菌液PCR结果 | 第39-42页 |
| 3.2.4.1 过表达载体转化农杆菌 | 第39-41页 |
| 3.2.4.2 RNAi载体转化农杆菌 | 第41-42页 |
| 3.3 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 水稻miR156靶基因OsSPL载体的水稻遗传转化与症状分析 | 第43-52页 |
| 4.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 4.1.1 材料 | 第43页 |
| 4.1.1.1 植物材料、试剂及仪器 | 第43页 |
| 4.1.1.2 引物设计 | 第43页 |
| 4.1.2 方法 | 第43-46页 |
| 4.1.2.1 水稻遗传转化 | 第43-45页 |
| 4.1.2.2 转基因水稻的分子检测 | 第45-46页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第46-52页 |
| 4.2.1 结果 | 第46-51页 |
| 4.2.1.1 PCR鉴定转基因水稻 | 第46-50页 |
| 4.2.1.2 转基因水稻OsSPL基因的相对表达量 | 第50页 |
| 4.2.1.3 转基因水稻表型分析 | 第50-51页 |
| 4.2.2 分析讨论 | 第51-52页 |
| 第五章 利用酵母双杂交系统研究水稻miR156靶基因OsSPL与RRSV蛋白的相互作用 | 第52-59页 |
| 5.1 材料与方法 | 第52-54页 |
| 5.1.1 材料 | 第52-53页 |
| 5.1.1.1 载体和菌株 | 第52页 |
| 5.1.1.2 引物的设计 | 第52页 |
| 5.1.1.3 试剂 | 第52-53页 |
| 5.1.2 方法 | 第53-54页 |
| 5.1.2.1 构建酵母表达载体 | 第53页 |
| 5.1.2.2 制备酵母感受态细胞AH109 | 第53页 |
| 5.1.2.3 共转化重组质粒 | 第53-54页 |
| 5.1.2.4 检测蛋白质的相互作用 | 第54页 |
| 5.2 结果与分析 | 第54-57页 |
| 5.2.1 目的基因的克隆及酵母表达载体的构建 | 第54-57页 |
| 5.2.2 酵母双杂交系统检测水稻miR156靶基因OsSPL与RRSV病毒蛋白之间的互作情况 | 第57页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第57-59页 |
| 第六章 全文小结与展望 | 第59-61页 |
| 6.1 小结 | 第59页 |
| 6.2 展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录一 荧光定量PCR引物名称及其序列 | 第69-70页 |
| 附录二 常用培养基的配置 | 第70-73页 |
| 附录三 本文所用的植物表达载体 | 第73-76页 |
| 附录四 转基因培养基的配制 | 第76-82页 |
| 附录五 酵母培养基的配制 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
