中文摘要 | 第3-4页 |
英文摘要 | 第4-5页 |
缩略词 | 第8-9页 |
1 绪论 | 第9-15页 |
1.1 引言 | 第9-10页 |
1.2 研究背景与研究进展 | 第10-12页 |
1.3 研究目的与研究意义 | 第12页 |
1.3.1 研究目的 | 第12页 |
1.3.2 研究意义 | 第12页 |
1.4 研究内容和技术路线 | 第12-13页 |
1.4.1 研究内容 | 第12-13页 |
1.4.2 技术路线 | 第13页 |
1.5 课题创新之处 | 第13-15页 |
2 绿僵菌MaSte12基因的克隆及功能研究 | 第15-79页 |
2.1 主要实验材料 | 第15-21页 |
2.1.1 供试菌株及实验昆虫 | 第15页 |
2.1.2 质粒载体 | 第15页 |
2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第15-16页 |
2.1.4 主要实验溶液及培养基配制 | 第16-20页 |
2.1.5 主要实验仪器与器材 | 第20-21页 |
2.2 主要研究方法 | 第21-51页 |
2.2.1 真菌的RNA提取及cDNA反转录 | 第21-24页 |
2.2.2 半定量与定量实验 | 第24-26页 |
2.2.3 MaSte12基因全长比对及cDNA全长克隆 | 第26-28页 |
2.2.4 MaSte12蛋白的生物信息学分析 | 第28-29页 |
2.2.5 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第29-30页 |
2.2.6 根癌农杆菌感受态细胞转化 | 第30-31页 |
2.2.7 农杆菌介导的绿僵菌转化(ATMT) | 第31-32页 |
2.2.8 真菌Genome DNA大量提取 | 第32-34页 |
2.2.9 真菌基因组微量提取 | 第34页 |
2.2.10 敲除与回复载体构建 | 第34-37页 |
2.2.11 PCR初筛敲除与回复转化子 | 第37-38页 |
2.2.12 Southern blot验证转化子 | 第38-41页 |
2.2.13 毒力测试 | 第41-42页 |
2.2.14 侵染结构观察 | 第42-43页 |
2.2.15 血淋巴中虫菌体观察 | 第43-44页 |
2.2.16 生长与抗逆能力测定 | 第44-45页 |
2.2.17 差异表达基因分析 | 第45-48页 |
2.2.18 差异表达基因验证 | 第48-51页 |
2.2.19 实验数据统计分析 | 第51页 |
2.3 实验结果与分析 | 第51-76页 |
2.3.1 MaSte12生物信息学分析 | 第51-54页 |
2.3.2 MaSte12敲除、回复载体构建与转化子筛选 | 第54-55页 |
2.3.3 MaSte12缺失影响绿僵菌孢子萌发,但不影响产孢和逆境耐受能力 | 第55-58页 |
2.3.4 MaSte12缺失菌株对蝗虫的侵染致病能力基本丧失 | 第58-60页 |
2.3.5 MaSte12缺失菌株附着胞形成率降低 | 第60-63页 |
2.3.6 受MaSte12调节的差异表达基因和信号通路分析 | 第63-76页 |
2.4 讨论 | 第76-79页 |
3 主要实验结论与后续工作建议 | 第79-81页 |
3.1 主要实验结论 | 第79页 |
3.2 后续工作 | 第79-81页 |
致谢 | 第81-83页 |
参考文献 | 第83-91页 |
附录 | 第91-118页 |
A 序列 | 第91-92页 |
B 附表 | 第92-118页 |