| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-20页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第8页 |
| 1.2 Pde4d的相关研究 | 第8-11页 |
| 1.2.1 Pde4d的关于发育和疾病的研究进展 | 第8-10页 |
| 1.2.2 Pde4d的生物信息学分析 | 第10-11页 |
| 1.3 microRNA对基因表达的调控 | 第11-14页 |
| 1.3.1 microRNA简介 | 第11-12页 |
| 1.3.2 microRNA生物学作用 | 第12-13页 |
| 1.3.3 内含子miRNA与宿主基因的调控关系 | 第13-14页 |
| 1.4 DNA甲基化对基因表达的调控 | 第14-16页 |
| 1.4.1 DNA甲基化简介 | 第14-15页 |
| 1.4.2 DNA甲基化的生物学作用 | 第15-16页 |
| 1.4.3 DNA甲基化对基因的调控作用 | 第16页 |
| 1.5 CRISPY/Cas9基因编辑技术 | 第16-18页 |
| 1.5.1 CRISPY/Cas9技术简介 | 第16-17页 |
| 1.5.2 CRISPY/Cas9技术应用 | 第17-18页 |
| 1.6 本文主要研究内容及技术路线 | 第18-20页 |
| 1.6.1 本文主要研究内容 | 第18-19页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第19-20页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验细胞系 | 第20页 |
| 2.1.2 实验载体与菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 实验试剂与试剂盒 | 第20-22页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第22页 |
| 2.1.5 生物信息学网站及数据分析软件 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.2.1 细胞水平实验 | 第23-24页 |
| 2.2.2 双荧光素酶活性实验 | 第24页 |
| 2.2.3 细胞总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4 RNA的反转录 | 第25-26页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.6 基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.7 Western Blot实验 | 第28-31页 |
| 2.2.8 Cas9敲除载体的构建、转化和阳性克隆筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.9 基因组DNA甲基化水平分析 | 第32-34页 |
| 第3章 miR-1904 对Pde4d的调控研究 | 第34-42页 |
| 3.1 引言 | 第34-35页 |
| 3.2 Pde4d及miR-1904 在各细胞系中的表达情况 | 第35-36页 |
| 3.3 双荧光素酶系统验证miR-1904 靶向Pde4d | 第36-38页 |
| 3.4 miR-1904 对Pde4d表达调控关系 | 第38-39页 |
| 3.4.1 过表达miR-1904 对Pde4d表达的影响 | 第38页 |
| 3.4.2 抑制miR-1904 表达对Pde4d表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39-41页 |
| 3.6 本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 CGI96对Pde4d和miR-1904 的调控研究 | 第42-50页 |
| 4.1 引言 | 第42-43页 |
| 4.2 CGI96甲基化状态分析 | 第43页 |
| 4.3 miR-1904 与Pde4d在Hepa1-6 及正常肝脏组织的表达水平 | 第43-44页 |
| 4.4 Cas9-CGI载体的构建 | 第44-46页 |
| 4.4.1 gRNA与检测引物的设计 | 第44页 |
| 4.4.2 敲除CGI96的Cas9-CGI载体构建 | 第44-45页 |
| 4.4.3 Cas9载体的转染效率与敲除效率 | 第45-46页 |
| 4.5 CGI96对Pde4d和miR-1904 的调控检测 | 第46-48页 |
| 4.6 讨论 | 第48页 |
| 4.7 本章小结 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录一 | 第56-57页 |
| 附录二 | 第57-58页 |
| 附录三 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
