| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1.文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 暗黑鳃金龟的习性 | 第13页 |
| 1.2 发生与危害 | 第13-14页 |
| 1.3 暗黑鳃金龟的综合防治 | 第14-18页 |
| 1.3.1 化学防治 | 第14-15页 |
| 1.3.2 物理防治 | 第15页 |
| 1.3.3 农业防治 | 第15页 |
| 1.3.4 生物防治 | 第15-18页 |
| 1.3.4.1 真菌类 | 第16页 |
| 1.3.4.2 苏云金芽孢杆菌 | 第16-17页 |
| 1.3.4.3 昆虫病原线虫 | 第17-18页 |
| 1.3.4.4 天敌昆虫 | 第18页 |
| 1.3.4.5 其他防治 | 第18页 |
| 1.4 类钙粘蛋白 | 第18-19页 |
| 1.4.1 类钙粘蛋白的种类和特征 | 第18-19页 |
| 1.4.2 类钙粘蛋白作用机制及研究进展 | 第19页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 1.6 研究内容及技术路线 | 第20-22页 |
| 1.6.1 研究的主要内容 | 第20-21页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 2.试验材料与方法 | 第22-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 供试虫源 | 第22页 |
| 2.1.2 供试菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 溶液和培养基配制 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 三种Bt蛋白对暗黑鳃金龟致死率的影响 | 第23-26页 |
| 2.2.1.1 Bt孢晶悬液制备 | 第23页 |
| 2.2.1.2 Bt芽孢镜检 | 第23-24页 |
| 2.2.1.3 Bt蛋白的提取 | 第24页 |
| 2.2.1.4 SDS-PAGE电泳检测 | 第24页 |
| 2.2.1.5 三种Bt蛋白浓度的测定（Bradford法） | 第24-26页 |
| 2.2.1.6 三种Bt蛋白对暗黑鳃金龟5日龄幼虫存活率的影响 | 第26页 |
| 2.2.1.7 数据处理 | 第26页 |
| 2.2.2 暗黑鳃金龟3龄幼虫中肠的转录组测序 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 中肠总RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.2.2 转录组测序 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 转录组数据分析 | 第27页 |
| 2.2.3 11种拟Bt受体蛋白片段的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3.1 总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.3.2 反转录合成第一链cDNA | 第27页 |
| 2.2.3.3 利用特异性引物扩增Bt受体蛋白片段 | 第27-28页 |
| 2.2.3.4 PCR产物回收 | 第28页 |
| 2.2.3.5 PCR回收产物连接至T载体 | 第28页 |
| 2.2.3.6 重组质粒的转化 | 第28页 |
| 2.2.3.7 阳性克隆验证 | 第28页 |
| 2.2.4 类钙粘蛋白全长cDNA的克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.4.2 反转录合成第一链cDNA | 第28-29页 |
| 2.2.4.3 PCR扩增部分序列 | 第29页 |
| 2.2.4.4 RACE引物设计 | 第29页 |
| 2.2.4.5 cDNA3’末端扩增—3’ RACE | 第29-30页 |
| 2.2.4.6 cDNA 5’末端扩增—5’ RACE | 第30页 |
| 2.2.4.7 质粒提取 | 第30页 |
| 2.2.4.9 序列分析 | 第30页 |
| 2.2.5 类钙粘蛋白相对表达量的分析 | 第30-31页 |
| 2.2.5.1 类钙粘蛋白、内参基因定量引物设计及片段的扩增 | 第30页 |
| 2.2.5.2 荧光定量PCR反应 | 第30页 |
| 2.2.5.3 数据处理 | 第30-31页 |
| 3.结果与分析 | 第31-52页 |
| 3.1 Bt蛋白对暗黑鳃金龟5日龄幼虫存活率的影响 | 第31-33页 |
| 3.1.1 Bt蛋白的提取 | 第31页 |
| 3.1.2 三种Bt蛋白浓度的测定 | 第31页 |
| 3.1.3 三种Bt蛋白对暗黑鳃金龟幼虫致死率的影响 | 第31-33页 |
| 3.2 暗黑鳃金龟幼虫中肠转录组测序 | 第33-40页 |
| 3.2.1 暗黑鳃金龟幼虫中肠总RNA的提取 | 第33-34页 |
| 3.2.2 暗黑鳃金龟3龄幼虫中肠转录组分析 | 第34-40页 |
| 3.2.2.1 暗黑鳃金龟3龄幼虫中肠Unigene亲缘性分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2.2 暗黑鳃金龟幼虫中肠Unigene的KOG分析 | 第35-37页 |
| 3.2.2.3 暗黑鳃金龟幼虫中肠Unigene的GO分析 | 第37页 |
| 3.2.2.4 暗黑鳃金龟幼虫中肠APN和类钙粘蛋白进化树的建立 | 第37-40页 |
| 3.3 11种拟Bt受体蛋白片段的克隆 | 第40页 |
| 3.4 类钙粘蛋白全长cDNA的克隆 | 第40-48页 |
| 3.4.1 类钙粘蛋白cDNA片段扩增 | 第40-41页 |
| 3.4.2 类钙粘蛋白cDNA全长扩增 | 第41-42页 |
| 3.4.3 暗黑鳃金龟幼虫类钙粘蛋白基因序列分析 | 第42-48页 |
| 3.4.4 暗黑鳃金龟幼虫类钙粘蛋白同源性分析 | 第48页 |
| 3.5 类钙粘蛋白基因表达量分析 | 第48-52页 |
| 3.5.1 引物特异性检测 | 第48-50页 |
| 3.5.2 不同龄期类钙粘蛋白相对表达量分析 | 第50-51页 |
| 3.5.3 3龄幼虫不同组织类钙粘蛋白相对表达量分析 | 第51-52页 |
| 4.结论 | 第52-53页 |
| 5.讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 1 | 第60-62页 |
| 附录 2 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
