| 中文摘要 | 第2-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-12页 |
| 第一章 Spred蛋白家族研究进展 | 第12-30页 |
| 1. Spred家族的表达及定位 | 第12-14页 |
| 2. Spred蛋白各个结构域及其功能 | 第14-16页 |
| 2.1 EVH-1结构域 | 第14-15页 |
| 2.2 KBD结构域 | 第15页 |
| 2.3 SPR结构域 | 第15-16页 |
| 3. Spred生物学功能 | 第16-19页 |
| 3.1 Spred对于Ras/Raf/MAPK信号通路的抑制功能 | 第16-17页 |
| 3.2 Spred-2与细胞分化 | 第17-18页 |
| 3.3 Spred-2其他生物学功能 | 第18-19页 |
| 4. Rab11蛋白研究进展 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-30页 |
| 第二章 Spred-2与Rab11相互作用影响大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞PC12分化 | 第30-52页 |
| 前言 | 第30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-41页 |
| 1.1 材料 | 第30-33页 |
| 1.1.1 细菌、质粒及细胞 | 第30-31页 |
| 1.1.2 主要试剂和配方 | 第31页 |
| 1.1.3 溶液配制 | 第31-32页 |
| 1.1.4 主要实验仪器 | 第32-33页 |
| 1.1.5 抗体和抑制剂 | 第33页 |
| 1.2 实验方法 | 第33-41页 |
| 1.2.1 目的基因亚克隆及突变体质粒构建 | 第33-36页 |
| 1.2.1.1 pcDNA3.1-Myc-His-Spred-2-WT的构建 | 第33-34页 |
| 1.2.1.2 pcDNA3.1-Myc-His-Spred-2-ΔEVH-1的构建 | 第34-35页 |
| 1.2.1.3 pcDNA3.1-Myc-His-Spred-2-ΔKBD的构建 | 第35页 |
| 1.2.1.4 pcDNA3.1-Myc-His-Spred-2-ΔSPR的构建 | 第35页 |
| 1.2.1.5 pcDNA3.1-Myc-His-Spred-2-W370A-L373A-Y386A-L389A的构建 | 第35页 |
| 1.2.1.6 Spred-2腺病毒质粒构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 1.2.2 细胞复苏、传代、冻存及计数 | 第36页 |
| 1.2.3 Western Blot检测蛋白表达 | 第36-39页 |
| 1.2.3.1 制备蛋白质样品 | 第36-37页 |
| 1.2.3.2 制备免疫共沉淀样品 | 第37页 |
| 1.2.3.3 SDS-PAGE电泳 | 第37-38页 |
| 1.2.3.4 上样 | 第38页 |
| 1.2.3.5 电泳 | 第38页 |
| 1.2.3.6 电转移 | 第38页 |
| 1.2.3.7 抗原抗体反应 | 第38-39页 |
| 1.2.4 转染 | 第39页 |
| 1.2.5 免疫荧光 | 第39-40页 |
| 1.2.5.1 细胞爬片 | 第39页 |
| 1.2.5.2 固定 | 第39页 |
| 1.2.5.3 透化 | 第39页 |
| 1.2.5.4 抗原抗体反应 | 第39-40页 |
| 1.2.5.5 封片 | 第40页 |
| 1.2.6 分析PC12细胞分化 | 第40-41页 |
| 2 实验结果 | 第41-47页 |
| 2.1 内源Spred-2与内源Rab11共定位 | 第41页 |
| 2.2 外源Spred-2与外源Rab11结合 | 第41-42页 |
| 2.3 Spred-2 C端与Rab11结合 | 第42-43页 |
| 2.4 外源Spred-2、Rab11及LC3三者共定位 | 第43-44页 |
| 2.5 Spred-2影响Rab11与LC3共定位 | 第44-45页 |
| 2.6 自噬诱导剂与抑制剂影响Rab11与LC3共定位 | 第45-46页 |
| 2.7 Spred-2与Rab11及LC3相互作用为抑制PC12细胞分化所必需 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第53-54页 |
