| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第15-35页 |
| 1.1 玉米纹枯病的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.1.1 玉米纹枯病的病原 | 第16页 |
| 1.1.1.1 R.solani的融合群 | 第16页 |
| 1.1.1.2 R.solani的生物学特性 | 第16页 |
| 1.1.2 发生发展规律及综合防治 | 第16-18页 |
| 1.1.2.1 发病规律 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 病害的防治 | 第17-18页 |
| 1.1.3 玉米抗纹枯病机制和抗病种质资源的筛选 | 第18-19页 |
| 1.1.3.1 植物的防卫反应与抗病基因 | 第18页 |
| 1.1.3.2 抗病种质资源的筛选 | 第18-19页 |
| 1.2 植物病原真菌的致病性 | 第19-21页 |
| 1.2.1 病原真菌的致病因素 | 第19-20页 |
| 1.2.1.1 植物成分降解酶 | 第19-20页 |
| 1.2.1.2 毒素 | 第20页 |
| 1.2.1.3 激素 | 第20页 |
| 1.2.2 病原真菌致病基因 | 第20-21页 |
| 1.3 植物的免疫系统与系统诱导抗病性 | 第21-26页 |
| 1.3.1 植物的免疫系统 | 第21-24页 |
| 1.3.1.1 PAMPs触发的免疫反应(PTI) | 第22-23页 |
| 1.3.1.2 效应蛋白触发的免疫反应(ETI) | 第23页 |
| 1.3.1.3 PTI与ETI的联系 | 第23-24页 |
| 1.3.2 植物的系统诱导抗病性 | 第24-26页 |
| 1.3.2.1 系统获得抗病性(SAR) | 第24-25页 |
| 1.3.2.2 诱导系统抗病性(ISR) | 第25页 |
| 1.3.2.3 系统诱导抗病性的信号传递 | 第25-26页 |
| 1.4 纤维素酶的研究进展 | 第26-30页 |
| 1.4.1 纤维素酶系的组成 | 第26-27页 |
| 1.4.2 纤维素酶的催化机制 | 第27-28页 |
| 1.4.3 纤维素酶的基因克隆与表达 | 第28-30页 |
| 1.5 立题依据 | 第30-32页 |
| 1.6 技术路线 | 第32-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-65页 |
| 2.1 试验材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第35页 |
| 2.1.2 细胞、植物及培养条件 | 第35页 |
| 2.1.3 酶、生化试剂、试剂盒和抗体 | 第35-36页 |
| 2.1.4 仪器 | 第36页 |
| 2.1.5 溶液及培养基配制 | 第36-38页 |
| 2.1.5.1 溶液配制 | 第36-37页 |
| 2.1.5.2 培养基配制 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-65页 |
| 2.2.1 EG1野生型与活性缺失突变型基因的真核表达 | 第38-50页 |
| 2.2.1.1 EG1活性缺失突变型基因的获得 | 第38-42页 |
| 2.2.1.2 EG1活力缺失突变型酵母工程菌的获得 | 第42-47页 |
| 2.2.1.3 EG1野生型与活性缺失突变型的诱导表达 | 第47-50页 |
| 2.2.2 EG1野生型与活性缺失突变型PAMP活性的分析 | 第50-55页 |
| 2.2.2.1 WT与D32A的接种试验 | 第50-54页 |
| 2.2.2.2 WT与D32A对烟草悬浮细胞的影响 | 第54-55页 |
| 2.2.3 利用PVX表达系统对wt和d32a进行表达 | 第55-60页 |
| 2.2.3.1 PVX表达序列的扩增 | 第55-57页 |
| 2.2.3.2 PVX表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 2.2.3.3 电击转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101感受态细胞 | 第58页 |
| 2.2.3.4 农杆菌接种烟草 | 第58-59页 |
| 2.2.3.5 烟草叶片提取物的分析检测 | 第59-60页 |
| 2.2.4 烟草悬浮细胞的荧光染色 | 第60-61页 |
| 2.2.4.1 DAPI染色 | 第60页 |
| 2.2.4.2 TUNEL染色 | 第60-61页 |
| 2.2.5 EG1 PAMP活性区段的确立 | 第61-63页 |
| 2.2.5.1 区段突变酶的表达与纯化 | 第61-62页 |
| 2.2.5.2 区段突变酶的PAMP活性分析 | 第62-63页 |
| 2.2.5.3 利用PVX表达系统对挑选出的wt-mx和d32a-mx进行表达 | 第63页 |
| 2.2.6 EG1 PAMP活性位点的初步研究 | 第63-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-93页 |
| 3.1 EG1野生型与活性缺失突变型基因的真核表达 | 第65-74页 |
| 3.1.1 EG1活性缺失突变型基因的获得 | 第65-67页 |
| 3.1.1.1 EG1野生型成熟肽序列wt的扩增 | 第65-66页 |
| 3.1.1.2 对wt进行定点突变获得d32a | 第66-67页 |
| 3.1.2 EG1活性缺失突变型酵母工程菌的获得 | 第67-71页 |
| 3.1.2.1 酵母表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 3.1.2.2 电击法转化P.pastoris GS115和酵母转化子的筛选与鉴定 | 第69-71页 |
| 3.1.3 EG1野生型与活性缺失突变型的诱导表达 | 第71-74页 |
| 3.1.3.1 WT和D32A的诱导表达和纯化 | 第71-72页 |
| 3.1.3.2 纯化产物的催化活性检测 | 第72页 |
| 3.1.3.3 纯化产物的SDS-PAGE分析 | 第72-73页 |
| 3.1.3.4 纯化产物的质谱(MS)和高效液相色谱(HPLC)检测 | 第73-74页 |
| 3.2 EG1野生型与活性缺失突变型PAMP活性的分析 | 第74-79页 |
| 3.2.1 WT和D32A的接种试验 | 第74-77页 |
| 3.2.1.1 WT和D32A接种玉米、烟草和拟南芥叶片 | 第74-76页 |
| 3.2.1.2 WT和D32A引起玉米和烟草防卫反应基因的过量表达 | 第76-77页 |
| 3.2.2 EG1野生型与活性缺失突变型对烟草悬浮细胞的影响 | 第77-79页 |
| 3.2.2.1 WT和D32A引起烟草悬浮细胞产生活性氧 | 第77-78页 |
| 3.2.2.2 WT和D32A引起烟草悬浮细胞钙离子(Ca~(2+))的积累 | 第78页 |
| 3.2.2.3 WT和D32A可以引起烟草悬浮细胞培养介质pH的升高 | 第78-79页 |
| 3.2.2.4 WT和D32A可以引起烟草悬浮细胞产生乙烯气体 | 第79页 |
| 3.3 利用PVX表达系统对wt和d32a进行表达 | 第79-84页 |
| 3.3.1 PVX表达序列的扩增 | 第79-80页 |
| 3.3.2 PVX表达载体的构建 | 第80-83页 |
| 3.3.3 农杆菌接种烟草 | 第83页 |
| 3.3.4 烟草叶片提取物的分析检测 | 第83-84页 |
| 3.4 EG1引起细胞的过敏性坏死反应 | 第84-85页 |
| 3.5 EG1 PAMP活性区段的确立 | 第85-90页 |
| 3.5.1 区段突变酶的表达与纯化 | 第85页 |
| 3.5.2 区段突变酶的PAMP活性分析 | 第85-89页 |
| 3.5.2.1 WT-M、D32A-M、WT和D32A接种玉米和烟草叶片 | 第86-88页 |
| 3.5.2.2 WT-M、D32A-M、WT和D32A对烟草悬浮细胞的影响 | 第88-89页 |
| 3.5.3 利用PVX表达系统对wt、d32a、wt-m和d32a-m进行表达 | 第89-90页 |
| 3.6 EG1 PAMP活性位点的初步研究 | 第90-93页 |
| 4 讨论与建议 | 第93-97页 |
| 4.1 讨论 | 第93-94页 |
| 4.1.1 纤维素酶的PAMP活性 | 第93页 |
| 4.1.2 纤维素酶PAMP活性位点的初步研究 | 第93-94页 |
| 4.2 建议 | 第94-97页 |
| 4.2.1 EG1 PAMP活性位点的研究 | 第94-95页 |
| 4.2.2 EG1植物受体的研究 | 第95-97页 |
| 5 结论 | 第97-99页 |
| 5.1 立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)内切纤维素酶EG1是PAMP分子 | 第97-98页 |
| 5.2 EG1的PAMP活性位点存在于保守区 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 攻读学位期间发表的文章 | 第115页 |
