| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-39页 |
| 1.1 里氏木霉纤维素酶诱导表达研究进展 | 第16-19页 |
| 1.1.1 里氏木霉纤维素酶的分类及作用 | 第16-18页 |
| 1.1.2 里氏木霉纤维素酶的诱导表达 | 第18-19页 |
| 1.2 纤维素酶基因转录调控研究进展 | 第19-24页 |
| 1.2.1 真菌转录因子分类 | 第20页 |
| 1.2.2 转录因子与纤维素酶基因表达调控 | 第20-23页 |
| 1.2.3 其它因子与纤维素酶基因表达调控 | 第23-24页 |
| 1.3 泛素修饰与真核生物基因转录调控 | 第24-31页 |
| 1.3.1 泛素系统的组成 | 第25-27页 |
| 1.3.2 泛素修饰与基因转录调控 | 第27-31页 |
| 1.4 染色质结构重塑与真核基因转录调控 | 第31-36页 |
| 1.4.1 SWI/SNF复合物组成 | 第31-33页 |
| 1.4.2 SWI/SNF复合物与基因转录调控 | 第33-35页 |
| 1.4.3 基因组水平染色质重塑复合物研究概述 | 第35-36页 |
| 1.5 染色体结构对纤维素酶基因转录的影响 | 第36-37页 |
| 1.6 论文研究内容及意义 | 第37-39页 |
| 第二章 里氏木霉转录抑制因子Rce1的筛选鉴定及功能分析 | 第39-66页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第39-43页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第39-40页 |
| 2.1.2 培养基及培养条件 | 第40-42页 |
| 2.1.3 所用引物及序列 | 第42-43页 |
| 2.1.4 主要试剂与仪器 | 第43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-53页 |
| 2.2.1 里氏木霉cbh1启动子诱饵菌株的构建及自激活检测 | 第43页 |
| 2.2.2 酵母单杂交文库筛选方法 | 第43-45页 |
| 2.2.3 酵母单杂交转化子的复筛与分析 | 第45页 |
| 2.2.4 酵母中抽提质粒的方法 | 第45-46页 |
| 2.2.5 阳性质粒验证方法 | 第46-47页 |
| 2.2.6 里氏木霉转化试剂及方法 | 第47-48页 |
| 2.2.7 里氏木霉转化子的筛选及验证 | 第48页 |
| 2.2.8 Southern blot方法 | 第48-50页 |
| 2.2.9 里氏木霉的培养方式 | 第50-51页 |
| 2.2.10 里氏木霉酶活及蛋白浓度测定方法 | 第51页 |
| 2.2.11 里氏木霉RNA提取 | 第51-52页 |
| 2.2.12 RNA样品中DNA的去除及反转录 | 第52页 |
| 2.2.13 系统发育分析 | 第52-53页 |
| 2.3 结果与分析 | 第53-64页 |
| 2.3.1 酵母单杂交体系的构建及文库筛选 | 第53-54页 |
| 2.3.2 Rce1生物信息学分析 | 第54-56页 |
| 2.3.3 rce1缺失菌的构建及验证分析 | 第56-57页 |
| 2.3.4 rce1缺失不影响菌体在固体平板及液体上的生长 | 第57-58页 |
| 2.3.5 rce1缺失提高纤维素酶基因及转录因子的表达 | 第58-60页 |
| 2.3.6 rce1缺失不影响菌株CCR,影响了纤维素酶基因的关闭 | 第60-61页 |
| 2.3.7 rce1回补菌恢复纤维素酶基因表达水平 | 第61-62页 |
| 2.3.8 rce1过表达菌株的构建及验证分析 | 第62-63页 |
| 2.3.9 rce1过表达抑制纤维素酶基因的表达 | 第63-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-66页 |
| 2.4.1 Rce1为Ga14类型的转录因子 | 第64页 |
| 2.4.2 Rce1是特异性响应纤维素的转录抑制因子 | 第64-66页 |
| 第三章 Rce1与纤维素酶基因启动子结合位点及体内作用机制探究 | 第66-89页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第66-68页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第66-67页 |
| 3.1.2 培养基及培养条件 | 第67页 |
| 3.1.3 所用引物及序列 | 第67-68页 |
| 3.2 实验方法 | 第68-73页 |
| 3.2.1 异源表达与检测 | 第68-69页 |
| 3.2.2 EMSA实验方法 | 第69-70页 |
| 3.2.4 链霉亲和素实验分析 | 第70页 |
| 3.2.5 footprinting实验分析 | 第70页 |
| 3.2.6 荧光观察 | 第70-71页 |
| 3.2.7 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第71-73页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第73-86页 |
| 3.3.1 EMSA证实Rce1体外能够结合纤维素酶基因启动子 | 第73-75页 |
| 3.3.2 Rce1在cbh1启动子上精细结合位点鉴定 | 第75-77页 |
| 3.3.3 Rce1与Xyr1竞争性结合cbh1启动子 | 第77-79页 |
| 3.3.4 Rce1在不同碳源条件下定位于细胞核 | 第79-81页 |
| 3.3.5 Rce1体内结合纤维素酶基因启动子 | 第81-83页 |
| 3.3.6 Rce1体内与Xyr1竞争性结合纤维素酶基因启动子 | 第83-84页 |
| 3.3.7 Xyr1过表达可以恢复Rce1对里氏木霉纤维素酶基因表达的影响 | 第84-86页 |
| 3.4 讨论 | 第86-89页 |
| 3.4.1 Rce1直接结合在纤维素酶基因启动子上 | 第86-87页 |
| 3.4.2 Rce1与Xyr1竞争性结合纤维素酶基因启动子 | 第87-89页 |
| 第四章 里氏木霉泛素结合酶TrUbc4的筛选鉴定及功能分析 | 第89-123页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第89-92页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第89-90页 |
| 4.1.2 培养基及培养条件 | 第90页 |
| 4.1.3 所用引物及序列 | 第90-92页 |
| 4.1.4 主要培养基 | 第92页 |
| 4.2 实验方法 | 第92-93页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第93-119页 |
| 4.3.1 TrUbc4的筛选鉴定 | 第93-95页 |
| 4.3.2 Trubc4敲除菌株的构建及生长测定 | 第95-97页 |
| 4.3.3 Trubc4缺失严重降抑制维素酶基因的表达 | 第97-99页 |
| 4.3.4 Trubc4过表达株的构建及分析 | 第99-102页 |
| 4.3.5 Trubc4特异性影响纤维素酶的表达 | 第102-104页 |
| 4.3.6 TrUbc4功能发挥依赖于催化活性位点C85 | 第104-106页 |
| 4.3.7 TrUbc4具有细胞核定位的现象 | 第106-107页 |
| 4.3.8 xyr1过表达不能恢复Trubc4缺失菌的表型 | 第107-108页 |
| 4.3.9 Trubc4缺失严重降低Xyr1与纤维素酶基因启动子的结合 | 第108-111页 |
| 4.3.10 TrUbc4相互作用蛋白的鉴定与分析 | 第111-113页 |
| 4.3.11 TrSnf12缺失严重降低纤维素酶表达 | 第113-117页 |
| 4.3.12 TrSnf12定位于细胞核 | 第117-118页 |
| 4.3.13 TrSnf12体外泛素化连接酶活性检测 | 第118-119页 |
| 4.4 讨论 | 第119-123页 |
| 4.4.1 TrUbc4是属于UBC家族的泛素结合酶 | 第119-120页 |
| 4.4.2 TrUbc4参与纤维素酶基因表达调控 | 第120-121页 |
| 4.4.3 E3 Hrd1并不影响纤维素酶的表达 | 第121-122页 |
| 4.4.4 TrSnf12参与纤维素酶基因表达调控 | 第122-123页 |
| 第五章 SWI/SNF复合物在里氏木霉纤维素酶基因诱导表达过程中的功能研究 | 第123-149页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第123-125页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第123-124页 |
| 5.1.2 培养基及培养条件 | 第124页 |
| 5.1.3 所用引物及序列 | 第124-125页 |
| 5.1.4 主要培养基 | 第125页 |
| 5.2 实验方法 | 第125页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第125-146页 |
| 5.3.1 TrSnf12与TrSwi1及Xyr1AD具有相互作用 | 第125-128页 |
| 5.3.2 Trswi1/snf5缺失造成维素酶无法表达 | 第128-132页 |
| 5.3.3 TrSwi1/Trsnf5过表达菌株表型分析 | 第132-135页 |
| 5.3.4 Trswi1/snf5缺失影响组蛋白H4在纤维素酶基因启动子上占据 | 第135-136页 |
| 5.3.5 TrSwi1/Snf5在诱导条件下能够被招募到纤维素酶基因启动子区 | 第136-140页 |
| 5.3.6 TrSwi1与纤维素酶基因启动子区的结合依赖于Xyr1 | 第140-142页 |
| 5.3.7 xyr1过表达可以基本恢复Trswi1及Trsnf5对纤维素酶表达的影响 | 第142-146页 |
| 5.4 讨论 | 第146-149页 |
| 5.4.1 TrSnf12介导了与Xyr1及TrSwi1之间的相互作用 | 第146-147页 |
| 5.4.2 TrSwi1及TrSnf5参与纤维素酶基因表达调控 | 第147-148页 |
| 5.4.3 TrSwi1及TrSnf5通过Xyr1招募到纤维素酶基因启动子区 | 第148-149页 |
| 全文总结与展望 | 第149-151页 |
| 攻读博士学位期间发表和待发表的学术论文 | 第151-152页 |
| 致谢 | 第152-154页 |
| 参考文献 | 第154-166页 |
| 附件 | 第166-185页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第185页 |
