| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-35页 |
| 第一节 肽类天然产物的简介 | 第11-12页 |
| 第二节 ATP-GRASP肽类天然产物 | 第12-20页 |
| 1.2.1 ATP-grasp酶结构及功能 | 第12-14页 |
| 1.2.2 ATP-grasp肽类天然产物生物合成简介 | 第14-16页 |
| 1.2.3 ATP-grasp肽类天然产物菜豆菌毒素的生物合成介绍 | 第16-20页 |
| 第三节 核糖体合成的肽类天然产物(RIPPs) | 第20-33页 |
| 1.3.1 RiPPs的分类 | 第20-21页 |
| 1.3.2 RiPPs天然产物生物合成特征 | 第21-26页 |
| 1.3.3 RiPPs天然产物波卓霉素生物合成简介 | 第26-33页 |
| 第四节 非核糖体合成的肽类天然产物(NRPSs) | 第33-34页 |
| 第五节 研究目的与前景 | 第34-35页 |
| 第二章 材料和方法 | 第35-49页 |
| 第一节 实验材料 | 第35-42页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第35-36页 |
| 2.1.2 培养基、试剂以及抗生素 | 第36-39页 |
| 2.1.3 研究所用引物及其序列 | 第39-41页 |
| 2.1.4 实验主要仪器和设备 | 第41-42页 |
| 第二节 方法 | 第42-49页 |
| 2.2.1 菌种的培养和存储 | 第42页 |
| 2.2.2 序列的测序及比对分析 | 第42页 |
| 2.2.3 蛋白表达 | 第42-44页 |
| 2.2.4 小蛋白分离胶的制备 | 第44-45页 |
| 2.2.5 大小蛋白的电泳 | 第45页 |
| 2.2.6 蛋白的纯化与浓缩 | 第45-46页 |
| 2.2.7 蛋白的脱盐与保存 | 第46页 |
| 2.2.8 AmtA蛋白及其突变株的超量表达及体外测活 | 第46-47页 |
| 2.2.9 AccQ-Fluor~(TM)衍生氨基酸 | 第47页 |
| 2.2.10 高效液相检测条件 | 第47页 |
| 2.2.11 菜豆菌毒素的发酵以及样品的制备与检测 | 第47-48页 |
| 2.2.12 波卓霉素的发酵以及样品的制备与检测 | 第48-49页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第49-67页 |
| 第一节 肽类天然产物菜豆菌毒素生物合成研究 | 第49-58页 |
| 3.1.1 LC-MS检测Phaseolotoxin | 第49-50页 |
| 3.1.2 脒基转移酶AmtA催化底物的宽泛性研究 | 第50-58页 |
| 3.1.2.1 AmtA蛋白的表达与测活 | 第53页 |
| 3.1.2.2 AmtA催化可逆的脒基转移反应 | 第53-54页 |
| 3.1.2.3 L-刀豆氨酸可作为AmtA脒基供体 | 第54-55页 |
| 3.1.2.4 只有L-Lys和L-Orn可作为AmtA脒基转移酶的脒基受体 | 第55-57页 |
| 3.1.2.5 AmtA M243P H244N突变株显示出和AmtA相同的活性 | 第57-58页 |
| 3.1.2.6 AmtA M246S突变株失去了脒基转移酶的活性 | 第58页 |
| 第二节 波卓霉素生物合成中间体的挖掘 | 第58-67页 |
| 3.2.1 波卓霉素的发酵与检测 | 第59-62页 |
| 3.2.2 波卓霉素基因簇的改造 | 第62-63页 |
| 3.2.3 野生型菌株中波卓霉素基因簇的敲除 | 第63-66页 |
| 3.2.4 波卓霉素生物合成中间体的挖掘 | 第66-67页 |
| 第四章 总结和讨论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 已发表成果 | 第78-79页 |
