| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 β-半乳糖苷酶的体系与来源 | 第10-12页 |
| 1.2 β-半乳糖苷酶的反应机制 | 第12-13页 |
| 1.3 不同微生物来源β-半乳糖苷酶酶学性质 | 第13-15页 |
| 1.4 β-半乳糖苷酶的应用 | 第15-18页 |
| 1.4.1 β-半乳糖苷酶用于解决乳糖不耐症 | 第15-16页 |
| 1.4.2 改良乳制品 | 第16页 |
| 1.4.3 乳清糖浆的制造及应用 | 第16-17页 |
| 1.4.4 生产低聚半乳糖 | 第17-18页 |
| 1.4.5 制药工业中的应用 | 第18页 |
| 1.4.6 β-半乳糖苷酶在免疫、检测、及环境监测方面的应用 | 第18页 |
| 1.4.7 分析食品中乳糖含量 | 第18页 |
| 1.5 β-半乳糖苷酶的研究现状 | 第18-19页 |
| 1.6 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第19-20页 |
| 1.7 本课题的研究意义与内容 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 实验主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验主要工具酶 | 第23页 |
| 2.1.5 主要溶液与缓冲液 | 第23-25页 |
| 2.1.6 主要培养基 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 米曲霉β-半乳糖苷酶基因的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的提取方法 | 第26页 |
| 2.2.3 米曲霉总RNA的提取与纯化 | 第26-28页 |
| 2.2.4 cDNA的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.5 基因克隆 | 第29-31页 |
| 2.2.6 重组表达质粒的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.7 毕赤酵母重组菌株GS115 (pPIC-O158)、GS115 (pPIC-AO)、GS(pPIC-O76)的构建与鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.8 重组酵母的筛选 | 第34页 |
| 2.2.9 重组酵母的诱导表达 | 第34页 |
| 2.2.10 重组酵母的β-半乳糖苷酶酶活测定 | 第34-35页 |
| 2.2.11 重组酵母GS115 (pPIC-O158)、GS115(pPIC-AO)、GS115 (pPIC-O76)的发酵产酶进程 | 第35页 |
| 2.3 重组β-半乳糖苷酶酶学性质的测定 | 第35-36页 |
| 2.3.1 最适反应温度 | 第35页 |
| 2.3.2 最适作用pH | 第35页 |
| 2.3.3 热稳定性 | 第35页 |
| 2.3.4 pH稳定性 | 第35页 |
| 2.3.5 金属离子的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.6 重组β-半乳糖苷酶动力学常数 | 第36页 |
| 2.3.7 底物特异性分析 | 第36页 |
| 2.4 反应产物分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-59页 |
| 3.1 不同来源的β-半乳糖苷酶的生物信息比对 | 第37-40页 |
| 3.2 表达质粒pPIC-O158、pPIC-AO及pPIC-O76的分子克隆 | 第40-46页 |
| 3.2.1 米曲霉总RNA的提取 | 第40页 |
| 3.2.2 目的基因的PCR扩增 | 第40-41页 |
| 3.2.3 表达质粒pPIC-O158、pPIC-AO及pPIC-O76的构建过程 | 第41-44页 |
| 3.2.4 pPIC9K质粒的提取与酶切验证 | 第44-45页 |
| 3.2.5 pPIC-O158、pPIC-AO及pPIC-O76的构建与酶切验证 | 第45-46页 |
| 3.3 β-半乳糖苷酶在毕赤酵母中分泌表达 | 第46-49页 |
| 3.3.1 重组毕赤氏酵母的构建与鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 重组转化子筛选 | 第47-48页 |
| 3.3.3 重组酵母GS115 (pPIC-O158)、GS115( pPIC-AO)、GS115( pPIC-O76)的发酵产酶进程 | 第48-49页 |
| 3.4 米曲霉β-半乳糖苷酶系酶学性质与黑曲霉β-半乳糖苷酶系的比较 | 第49-57页 |
| 3.4.1 β-半乳糖苷酶最适作用温度的比较 | 第50-51页 |
| 3.4.2 β-半乳糖苷酶最适作用pH的比较 | 第51页 |
| 3.4.3 重组β-半乳糖苷酶热稳定性的比较 | 第51-52页 |
| 3.4.4 重组β-半乳糖苷酶pH稳定性的比较 | 第52-54页 |
| 3.4.5 金属离子对β-半乳糖苷酶酶活影响的比较 | 第54页 |
| 3.4.6 β-半乳糖苷酶动力学常数的比较 | 第54-56页 |
| 3.4.7 β-半乳糖苷酶的底物特异性的比较 | 第56-57页 |
| 3.5 米曲霉β-半乳糖苷酶反应产物分析 | 第57-59页 |
| 4 结论 | 第59-60页 |
| 5 展望 | 第60-61页 |
| 6 参考文献 | 第61-69页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第69-70页 |
| 8 致谢 | 第70页 |
