| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 符号说明及缩略词 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-28页 |
| 1.1 植物木质素合成途径及其基因调控研究进展 | 第16-22页 |
| 1.1.1 木质素前体的合成 | 第16-17页 |
| 1.1.2 木质素前体的运输 | 第17-19页 |
| 1.1.3 木质素单体的聚合 | 第19-21页 |
| 1.1.4 木质素合成调控 | 第21-22页 |
| 1.2 苯丙烷次生代谢的糖基化研究进展 | 第22-25页 |
| 1.2.1 糖基转移酶简述 | 第23-24页 |
| 1.2.2 苯丙烷代谢物的糖基化 | 第24-25页 |
| 1.3 木质素前体的糖基化与木质素合成 | 第25-27页 |
| 1.3.1 木质素单体糖基化的普遍存在以及可能意义 | 第25-26页 |
| 1.3.2 糖苷酶与木质素合成关系研究 | 第26页 |
| 1.3.3 糖基转移酶与木质素合成关系研究 | 第26-27页 |
| 1.4 立题意义及研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 菌种和载体 | 第28页 |
| 2.1.3 实验试剂与仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.4 常用培养基配制 | 第29页 |
| 2.1.5 主要溶液配制 | 第29-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-49页 |
| 2.2.1 植物DNA提取 | 第31页 |
| 2.2.2 植物RNA的提取与反转录 | 第31-32页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.4 Real-time PCR扩增反应 | 第33-34页 |
| 2.2.5 克隆基因片断的纯化回收 | 第34页 |
| 2.2.6 克隆基因的连接 | 第34页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备、质粒转化、质粒提取和酶切验证 | 第34-35页 |
| 2.2.8 农杆菌感受态细胞的制备和质粒转化 | 第35-36页 |
| 2.2.9 原核表达载体pGEX3H-UGT的构建及转化 | 第36-37页 |
| 2.2.10 GST融合蛋白的表达纯化 | 第37-39页 |
| 2.2.11 酶促反应条件 | 第39-40页 |
| 2.2.12 HPLC以及LC-MS分析条件 | 第40-41页 |
| 2.2.13 标准曲线的绘制 | 第41-43页 |
| 2.2.14 各基因启动子克隆与GUS报告载体构建 | 第43页 |
| 2.2.15 植物表达载体构建 | 第43页 |
| 2.2.16 拟南芥转化及转基因植株的筛选 | 第43-44页 |
| 2.2.17 GUS染色分析 | 第44-45页 |
| 2.2.18 石蜡切片 | 第45-46页 |
| 2.2.19 透射电镜 | 第46页 |
| 2.2.20 扫描电镜 | 第46-47页 |
| 2.2.21 木质素H、G和S型组分含量测定 | 第47页 |
| 2.2.22 木质素染色观察 | 第47页 |
| 2.2.23 植物体内木质素单体糖苷的提取以及其后HPLC分析条件 | 第47页 |
| 2.2.24 花粉管染色 | 第47-48页 |
| 2.2.25 花粉粒体外萌发 | 第48页 |
| 2.2.26 花青苷和黄酮提取 | 第48页 |
| 2.2.27 转录组测序 | 第48-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-96页 |
| 3.1 ugt72b1突变体鉴定与表型分析 | 第49-51页 |
| 3.2 UGT72B1功能恢复系的构建与表型分析 | 第51-53页 |
| 3.2.1 UGT72B1功能恢复系的植物表达载体构建 | 第51-52页 |
| 3.2.2 UGT72B1功能恢复系纯合株系的筛选 | 第52-53页 |
| 3.2.3 功能恢复株系表型分析 | 第53页 |
| 3.3 ugt72b1突变体茎中细胞壁木质化出现异常 | 第53-54页 |
| 3.4 ugt72b1突变体茎中细胞壁加厚 | 第54-57页 |
| 3.5 ugt72b1突变体茎中木质素含量变化 | 第57-58页 |
| 3.6 原核表达载体构建 | 第58-59页 |
| 3.6.1 克隆载体的构建 | 第58页 |
| 3.6.2 原核表达载体构建 | 第58-59页 |
| 3.7 酶蛋白的原核表达与纯化 | 第59页 |
| 3.8 体外酶活性鉴定 | 第59-65页 |
| 3.8.1 纯化的UGT72B1融合蛋白与松柏醇的反应 | 第60-62页 |
| 3.8.2 纯化的UGT72B1融合蛋白与松柏醛的反应 | 第62-63页 |
| 3.8.3 纯化的UGT72B1融合蛋白与二氢松柏醇的反应 | 第63页 |
| 3.8.4 纯化的UGT72B1融合蛋白与对羟基肉桂醇的反应 | 第63-64页 |
| 3.8.5 纯化的UGT72B1融合蛋白与对羟基肉桂醛的反应 | 第64页 |
| 3.8.6 纯化的UGT72B1融合蛋白与其它苯丙烷代谢中间产物以及激素的反应 | 第64页 |
| 3.8.7 纯化的UGT72B3融合蛋白与芥子醛的反应 | 第64页 |
| 3.8.8 纯化的UGT72B3融合蛋白与松柏醛的反应 | 第64页 |
| 3.8.9 纯化的UGT72B3融合蛋白与其它苯丙烷代谢中间产物的反应 | 第64-65页 |
| 3.8.10 UGT72B2融合蛋白活性检测 | 第65页 |
| 3.9 糖基转移酶动力学常数分析 | 第65-67页 |
| 3.9.1 比酶活分析 | 第65-66页 |
| 3.9.2 动力学常数分析 | 第66-67页 |
| 3.10 拟南芥UGT72B1基因的表达特异性研究 | 第67-69页 |
| 3.10.1 GUS染色分析 | 第67-69页 |
| 3.10.2 拟南芥各组织中UGT72B1表达的实时定量PCR分析 | 第69页 |
| 3.11 突变体中木质素合成相关基因的表达分析 | 第69-73页 |
| 3.11.1 前体合成相关基因的表达分析 | 第70-71页 |
| 3.11.2 前体运输及聚合相关基因的表达分析 | 第71-72页 |
| 3.11.3 木质素合成相关转录因子的表达分析 | 第72-73页 |
| 3.12 ugt72b1突变体转录组数据分析 | 第73-79页 |
| 3.12.1 转录组测序质量概况 | 第73-74页 |
| 3.12.2 差异表达基因筛选 | 第74页 |
| 3.12.3 差异表达基因的GO分类及KEGG富集分析 | 第74-79页 |
| 3.13 ugt72b1突变体及过表达体内源松柏苷含量分析 | 第79-82页 |
| 3.13.1 UGT72B1过表达体构建 | 第79-80页 |
| 3.13.2 UGT72B1过表达株系筛选 | 第80页 |
| 3.13.3 糖苷含量测定 | 第80-82页 |
| 3.14 UGT72B2、UGT72B3对ugt72b1表型的恢复 | 第82-83页 |
| 3.14.1 UGT72B2、UGT72B3过表达载体的构建 | 第82页 |
| 3.14.2 ugt72b1背景下UGT72B2和UGT72B3过表达株系的获得与表型分析 | 第82-83页 |
| 3.15 拟南芥UGT72B2、UGT72B3与UGT72E2基因的表达特异性研究 | 第83-86页 |
| 3.15.1 载体构建及株系筛选 | 第83-84页 |
| 3.15.2 GUS染色分析 | 第84-86页 |
| 3.15.3 拟南芥各组织中UGT72B3与UGT72E2实时定量PCR分析 | 第86页 |
| 3.16 UGT72B3与UGT72E2在ugt72b1突变体中的表达分析 | 第86-87页 |
| 3.17 ugt72b1其他表型分析 | 第87-96页 |
| 3.17.1 花青素与黄酮糖苷的积累 | 第87-90页 |
| 3.17.2 育性的降低 | 第90-96页 |
| 第四章 讨论 | 第96-101页 |
| 4.1 UGT72B1在木质素合成过程中的作用 | 第96-97页 |
| 4.2 72B家族和72E家族成员在木质素合成过程中的关系 | 第97-98页 |
| 4.3 UGT72B1的底物多样性 | 第98页 |
| 4.4 木质素合成中可能存在着与糖基化修饰有关的反馈调节机制 | 第98-101页 |
| 总结及本论文创新点 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-115页 |
| 在学期间发表论文 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 附件 | 第117-120页 |
