| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-28页 |
| 1.1 Chromodomain蛋白在表观遗传调控中的功能 | 第15-20页 |
| 1.1.1 Chromodomain蛋白概述 | 第15-16页 |
| 1.1.2 Chromodomain蛋白的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.3 Chromodomain模体的结构 | 第17-19页 |
| 1.1.4 Chromodomain蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 1.2 模式生物嗜热四膜虫概述 | 第20-23页 |
| 1.3 本课题的研究意义 | 第23页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第二章 嗜热四膜虫中TCD1基因的生物信息学分析 | 第28-41页 |
| 2.1 前言 | 第28页 |
| 2.2 材料和试剂 | 第28-30页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.2.2 试剂和工具酶 | 第28-29页 |
| 2.2.3 引物 | 第29页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第29页 |
| 2.2.5 主要试剂的制备 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.3.1 嗜热四膜虫的培养、饥饿及配对 | 第30页 |
| 2.3.2 嗜热四膜虫全基因组的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.3 嗜热四膜虫总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.3.4 RT-PCR | 第31页 |
| 2.3.5 3'RACE鉴定TCD1β转录本 | 第31-35页 |
| 2.3.6 Tcd1蛋白序列分析 | 第35页 |
| 2.4 结果 | 第35-38页 |
| 2.4.1 Tcd1蛋白序列分析 | 第35页 |
| 2.4.2 Tcd1中chromodomain保守性分析 | 第35-36页 |
| 2.4.3 TCD1基因表达谱 | 第36-37页 |
| 2.4.4 TCD1β转录本鉴定 | 第37-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 第三章 Tcd1对新大核发育中基因组重排和修复是必须的 | 第41-51页 |
| 3.1 前言 | 第41页 |
| 3.2 材料 | 第41-43页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第41页 |
| 3.2.2 试剂与工具酶 | 第41页 |
| 3.2.3 引物 | 第41-42页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第42页 |
| 3.2.5 主要试剂的配制 | 第42-43页 |
| 3.3 试验方法 | 第43-44页 |
| 3.3.1 嗜热四膜虫的培养、饥饿及配对 | 第43页 |
| 3.3.2 TCD1敲除载体的构建 | 第43页 |
| 3.3.3 四膜虫细胞转化及重组鉴定 | 第43页 |
| 3.3.4 IES分析 | 第43页 |
| 3.3.5 H3K9me2和H3K27me3间接免疫荧光定位 | 第43-44页 |
| 3.3.6 γH2A.X间接免疫荧光定位 | 第44页 |
| 3.4 结果 | 第44-49页 |
| 3.4.1 TCD1敲除株的构建和重组鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.2 敲除TCD1导致后代不能存活 | 第45-46页 |
| 3.4.3 敲除TCD1不影响H3K9me2和H3k27me3的建立 | 第46-47页 |
| 3.4.4 TCD1的缺失影响大核基因组重排 | 第47-48页 |
| 3.4.5 Tcd1参与四膜虫基因组DNA的修复 | 第48-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第四章 嗜热四膜虫Tcd1功能结构域的突变影响其定位模式 | 第51-66页 |
| 4.1 前言 | 第51页 |
| 4.2 材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第51页 |
| 4.2.2 试剂与工具酶 | 第51页 |
| 4.2.3 引物 | 第51-52页 |
| 4.2.4 主要实验仪器 | 第52页 |
| 4.2.5 主要试剂的配制 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.3.1 嗜热四膜虫细胞的培养、饥饿和配对 | 第52页 |
| 4.3.2 定点突变 | 第52页 |
| 4.3.3 过表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 4.3.4 嗜热四膜虫细胞转化及稳定突变株的筛选 | 第53页 |
| 4.3.5 间接免疫荧光定位 | 第53页 |
| 4.3.6 HA-Tcd1W159AW437A与H3K9me2共定位 | 第53页 |
| 4.3.7 Western blot | 第53-54页 |
| 4.4 结果 | 第54-62页 |
| 4.4.1 Tcd1突变体的构建 | 第54-57页 |
| 4.4.2 Tcd1在亲本大核和新大核上呈动态分布 | 第57页 |
| 4.4.3 Tcd1和Tcd1β分别定位在大核和细胞质 | 第57-59页 |
| 4.4.4 CD1和CD2结构域共同决定了Tcd1的核内定位模式 | 第59-60页 |
| 4.4.5 CSD结构域决定了Tcd1的核内定位 | 第60-61页 |
| 4.4.6 CD1和CD2突变影响Tcd1与H3K9me2的相互作用 | 第61-62页 |
| 4.5 讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 总结与展望 | 第67-69页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简况及联系方式 | 第71-73页 |
