动物衣原体TaqMan-MGB探针多重荧光定量PCR方法的建立及应用
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-21页 |
| ·衣原体科的简介 | 第12-16页 |
| ·主要致病衣原体 | 第12-14页 |
| ·病原学 | 第14-15页 |
| ·衣原体的基因组学 | 第15页 |
| ·衣原体蛋白组学 | 第15-16页 |
| ·衣原体疫苗研究进展 | 第16-17页 |
| ·弱毒疫苗 | 第16页 |
| ·灭活疫苗 | 第16-17页 |
| ·核酸疫苗 | 第17页 |
| ·动物衣原体病的诊断学方法的研究进展 | 第17-19页 |
| ·直接染色观察 | 第17页 |
| ·酶免检测 | 第17页 |
| ·细胞培养的方法 | 第17-18页 |
| ·间接血凝试验 | 第18页 |
| ·胶体金技术 | 第18页 |
| ·补体结合试验 | 第18页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第18-19页 |
| ·药敏试验 | 第19页 |
| ·DNA芯片技术 | 第19页 |
| ·聚合酶链反应(PCR)的研究 | 第19-20页 |
| ·TaqMan—MGB探针的应用 | 第20-21页 |
| 第2章 引言 | 第21-24页 |
| ·研究目的及意义 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-23页 |
| ·基因组序列的分析、引物与探针的设计 | 第21-22页 |
| ·建立三种衣原体的单重荧光定量PCR方法 | 第22页 |
| ·多重荧光定量PCR方法的建立 | 第22页 |
| ·所建立的多重荧光定量PCR方法与其它方法的比较 | 第22-23页 |
| ·多重荧光定量PCR方法的建立的技术路线 | 第23-24页 |
| 第3章 单重荧光定量PCR方法的优化及建立 | 第24-52页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·标准菌株、细胞株 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·试剂配制 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-35页 |
| ·序列分析与引物设计 | 第26-28页 |
| ·衣原体DNA基因组的提取 | 第28-29页 |
| ·目的基因的扩增 | 第29页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第29-30页 |
| ·目的片段的克隆 | 第30-32页 |
| ·单重荧光PCR反应条件的优化 | 第32-34页 |
| ·单重突光定量PCR反应中探计浓度的优化 | 第32-33页 |
| ·单重荧光PCR反应中引物浓度优化 | 第33页 |
| ·单重焚光PCR反应体系中Tm值的优化 | 第33-34页 |
| ·单重荧光定量PCR特异性的试验 | 第34页 |
| ·单重荧光定量PCR灵敏度试验 | 第34页 |
| ·单重荧光定量PCR标准曲线的构建 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-50页 |
| ·衣原体科已知序列的保守性和特异性 | 第35-38页 |
| ·衣原体核酸的扩增结果 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·重组质粒测序结果及序列分析 | 第40-41页 |
| ·三种重组阳性质粒OD值的测定结果 | 第41页 |
| ·单重荧光定量PCR反应条件优化结果 | 第41-47页 |
| ·单重荧光定量PCR探针优化的结果 | 第41-42页 |
| ·单重焚光定量PCR引物优化的结果 | 第42-43页 |
| ·单重劳光定量PCR反应体系中Tm值优化结果 | 第43-47页 |
| ·单重荧光定量PCR特异性的鉴定 | 第47-48页 |
| ·单重荧光定量PCR灵敏度试验 | 第48-49页 |
| ·单重荧光定量PCR标准曲线的构建 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第4章 多重荧光定量PCR方法的建立及应用 | 第52-67页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·实验菌株 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·试剂配制 | 第52页 |
| ·多重荧光定量PCR方法的建立 | 第52-55页 |
| ·多重荧光定量PCR反应条件的优化 | 第52-54页 |
| ·多重荧光定量PCR特异性的试验 | 第54页 |
| ·多重荧光定量PCR灵敏度试验 | 第54-55页 |
| ·多重荧光定量PCR稳定性试验 | 第55页 |
| ·多重荧光定量PCR标准曲线的构建 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-62页 |
| ·多重荧光PCR反应中引物浓度的优化的试验结果 | 第55-56页 |
| ·多重荧光PCR反应探针浓度的优化的试验结果 | 第56-57页 |
| ·多重荧光PCR反应体系中Tm值的优化 | 第57-59页 |
| ·多重荧光定量PCR特异性试验结果 | 第59页 |
| ·多重荧光定量PCR方法灵敏度试验结果 | 第59-60页 |
| ·多重荧光定量PCR稳定性试验结果 | 第60-61页 |
| ·标准曲线的构建试验结果 | 第61-62页 |
| ·多重荧光定量PCR方法的应用 | 第62-64页 |
| ·临床应用 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| ·三种衣原体单重荧光定量PCR方法的建立 | 第65页 |
| ·衣原体多重荧光定量PCR方法的建立 | 第65-66页 |
| ·衣原体多重荧光定量PCR方法的评价 | 第66页 |
| ·衣原体多重荧光定量PCR方法的临床应用的评价 | 第66页 |
| ·后续工作建议及展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 缩略词表 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 个人简历、在学校期间发表的学术论文及取得研究成果 | 第78页 |
