| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-20页 |
| ·病原学研究 | 第14-15页 |
| ·危害及流行病学研究 | 第15页 |
| ·Mhp免疫原性抗原蛋白的研究 | 第15-20页 |
| ·粘附因子 | 第16-17页 |
| ·膜蛋白 | 第17-19页 |
| ·胞质蛋白 | 第19-20页 |
| 第二章 引言 | 第20-22页 |
| 第三章 mhp168_218、mhp168_366、mhp168_477基因的生物信息学分析 | 第22-28页 |
| ·材料与方法 | 第22-23页 |
| ·结果 | 第23-28页 |
| ·保守性分析 | 第23-24页 |
| ·信号肽的预测 | 第24-25页 |
| ·跨膜区的预测 | 第25-27页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第27页 |
| ·稀有密码子及酶切位点分析 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28页 |
| 第四章 猪肺炎支原体mph168_218基因的分段克隆表达 | 第28-50页 |
| ·材料 | 第28-33页 |
| ·菌株及质粒 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第30-33页 |
| ·试验方法 | 第33-41页 |
| ·菌株的培养 | 第33页 |
| ·Mhp基因组DNA的制备 | 第33-34页 |
| ·基因mhp168_218-1、mhp168_218-2、mhp168_218-3、mhp168_218-4的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的保护性碱基的酶切 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp 168_218-1、pGEX-6P-2-mhp 168_218-2pMD19-T-mhp168_218-3、pGEX-6P-2-Mhp168_218-4的构建 | 第36-38页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_218-3的定点突变 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_218-3-A的构建 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_218-1、pGEX-6P-2-mhp168_218-2、pGE X-6P-2-mhp168_218-3-A、pGEX-6P-2-mhp168_218-4在E.coli XL-1中的表达与蛋白纯化 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-48页 |
| ·PCR扩增结果 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_218-1、pGEX-6P-2-mhp168_218-2、pMD19-T-mhp168_218-3和pGEX-6P-2-mhp168_218-4的酶切鉴定 | 第42-44页 |
| ·pMD19-T-mhp168_218-3的定点突变及转化DH5α感受态 | 第44-45页 |
| ·pGEX-6P-2-mhp168_218-3-A的构建 | 第45页 |
| ·测序结果 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE检测4个蛋白的表达与纯化 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 猪肺炎支原体mhp168_366及mhp168_477基因的定点突变、原核表达与纯化 | 第50-68页 |
| ·材料(参考4.1) | 第50页 |
| ·方法 | 第50-56页 |
| ·基因mhp168_366、mhp168_477的扩增 | 第50-52页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_366、pMD19-T-mhp168_477的构建 | 第52页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_366的定点突变 | 第52-54页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_477的定点突变 | 第54-56页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_366-ABCD及pGEX-6P-2-mhp168_477-ABC的构建 | 第56页 |
| ·测序 | 第56页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp 168_366-ABCD、pGEX-6P-2-mhp 168_477-ABC在E.coli XL-1中的表达与蛋白纯化 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-65页 |
| ·基因mhp168_366与基因m细168_477的扩增结果 | 第56-57页 |
| ·基因mhp_168_366的定点突变 | 第57-60页 |
| ·基因mhp168_477的定点突变 | 第60-63页 |
| ·pGEX-6P-2-Mhpl68_366-ABCD和pGEX-6P-2-Mhp168_477-ABC的构建 | 第63-64页 |
| ·测序结果 | 第64页 |
| ·SDS-PAGE检测2个蛋白的表达与纯化 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| 第六章 蛋白的免疫活性研究 | 第68-76页 |
| ·材料 | 第68-69页 |
| ·实验动物 | 第68页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第68页 |
| ·主要试剂的配制 | 第68-69页 |
| ·方法 | 第69-70页 |
| ·抗血清的制备 | 第69页 |
| ·免疫效果的检测 | 第69-70页 |
| ·结果 | 第70-73页 |
| ·间接ELISA检测结果 | 第70-71页 |
| ·免疫印迹试验结果 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73-76页 |
| 第七章 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附表 | 第84-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
