| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 小反刍兽疫的流行病学 | 第12-13页 |
| 2 小反刍兽疫病毒的分子生物学特性 | 第13-16页 |
| ·小反刍兽疫病毒的形态结构 | 第13页 |
| ·小反刍兽疫病毒基因组的结构和功能 | 第13-15页 |
| ·小反刍兽疫病毒的理化特性 | 第15页 |
| ·小反刍兽疫病毒的复制过程 | 第15-16页 |
| 3 小反刍兽疫的临床表现和病理变化 | 第16-17页 |
| 4 小反刍兽疫的诊断 | 第17-18页 |
| ·病毒分离培养 | 第17页 |
| ·血清学检测 | 第17-18页 |
| ·分子生物学检测 | 第18页 |
| 5 小反刍兽疫的防控及疫苗研究现状 | 第18-20页 |
| ·传统疫苗 | 第18-19页 |
| ·新一代候选疫苗 | 第19-20页 |
| 6 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 小反刍兽疫病毒Nigeria75/1 株H蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第21-44页 |
| 1.材料与方法 | 第21-34页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·质粒、菌株、病毒、细胞系和实验动物 | 第21页 |
| ·主要药品、试剂和仪器 | 第21-22页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第22页 |
| ·主要缓冲液（溶液）及其配制 | 第22-24页 |
| ·实验方法 | 第24-34页 |
| ·病毒扩增 | 第24页 |
| ·H基因引物的设计 | 第24-25页 |
| ·病毒总RNA的提取 | 第25页 |
| ·H基因的扩增 | 第25-26页 |
| ·DNA片段的回收纯化 | 第26页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第26-27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的提取 | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·pGEX-KG-PPRV-H的诱导表达 | 第28页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第28页 |
| ·表达产物pGEX-KG-PPRV-H的SDS-PAGE分析 | 第28页 |
| ·表达产物pGEX-KG-PPRV-H的Western Blot分析 | 第28页 |
| ·pGEX-KG-PPRV-H蛋白的包涵体纯化及定量 | 第28-29页 |
| ·动物免疫 | 第29-30页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第30页 |
| ·间接ELISA法检测小鼠的免疫效价 | 第30页 |
| ·SP2/0 骨髓瘤细胞的准备 | 第30-31页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第31页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第31页 |
| ·细胞融合 | 第31-32页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第32页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体计数 | 第32-33页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第33页 |
| ·单克隆抗体效价的检测 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的亚型鉴定 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的IFA分析 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体的Western Blot分析 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-42页 |
| ·H基因片段PCR扩增及克隆质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·pGEX-KG-H重组蛋白的表达及纯化 | 第35-36页 |
| ·pGEX-KG-H蛋白最佳抗原包被浓度的测定 | 第36-37页 |
| ·小鼠免疫效价的检测 | 第37-38页 |
| ·杂交瘤细胞株的筛选 | 第38页 |
| ·杂交瘤细胞遗传稳定性的分析 | 第38-39页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体效价的检测 | 第40页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体的IFA检测 | 第41页 |
| ·单克隆抗体的Western Blot分析 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 4 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 小反刍兽疫病毒H蛋白在杆状病毒中的表达及其免疫原性研究 | 第44-67页 |
| 1.材料与方法 | 第44-55页 |
| ·实验材料 | 第44-47页 |
| ·质粒、菌株、病毒、细胞系和实验动物 | 第44页 |
| ·主要药品、试剂和仪器 | 第44-45页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第45页 |
| ·主要缓冲液（溶液）及其配制 | 第45-47页 |
| ·实验方法 | 第47-55页 |
| ·H基因和M13引物的设计 | 第47-48页 |
| ·PPRV-bac-H基因的扩增 | 第48-49页 |
| ·DNA片段的回收纯化 | 第49页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第49页 |
| ·连接反应 | 第49页 |
| ·连接产物的转化 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的提取 | 第50页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第50页 |
| ·重组穿梭质粒的构建 | 第50页 |
| ·重组穿梭质粒的提取 | 第50-51页 |
| ·重组穿梭质粒的鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H的获得 | 第52页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H的扩增 | 第52页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H的毒价测定 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白Bacmid-PPRV-H的IFA分析 | 第53页 |
| ·重组蛋白Bacmid-PPRV-H的Western Blot分析 | 第53页 |
| ·重组蛋白Bacmid-PPRV-H的表达特性 | 第53页 |
| ·重组蛋白Bacmid-PPRV-H最优表达条件的摸索 | 第53页 |
| ·重组蛋白Bacmid-PPRV-H的免疫原性分析 | 第53-55页 |
| ·免疫原的制备 | 第53-54页 |
| ·动物实验 | 第54页 |
| ·血清特异性抗体效价检测 | 第54页 |
| ·血清中和抗体检测 | 第54-55页 |
| ·淋巴细胞增殖实验 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-65页 |
| ·PPRV-bac-H基因片段PCR扩增及克隆质粒的鉴定 | 第55-57页 |
| ·重组穿梭质粒bacmid的鉴定 | 第57-58页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H的获得 | 第58页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H的毒价测定 | 第58页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H蛋白的IFA分析 | 第58-59页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H蛋白的Western Blot分析 | 第59-61页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H蛋白的表达特性 | 第61页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H蛋白的最优表达条件 | 第61-63页 |
| ·血清特异性抗体效价检测 | 第63页 |
| ·血清中和抗体效价 | 第63-64页 |
| ·淋巴细胞增殖反应 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-66页 |
| 4 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
