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猪链球菌2型表面精氨酸肽酶的鉴定与其功能的研究

摘要第1-9页
Abstract第9-12页
缩略表第12-14页
1 文献综述第14-28页
   ·猪链球菌病第14-15页
   ·溶血素促进S.suis感染第15-16页
   ·猪链球菌菌毛基因簇和菌毛与S.suis致病关系。第16-18页
   ·S.suis侵袭性酶类第18-21页
   ·猪链球菌调控机制第21-25页
     ·独立型转录因子第21-22页
     ·双组分调控系统第22-23页
     ·真核生物类似的丝氨酸/苏氨酸激酶与磷酸酶第23页
     ·非编码调节RNA第23-25页
   ·基因组多样性第25-26页
     ·基因岛和接合转移原件第25-26页
     ·噬菌体第26页
   ·猪链球菌的感染机制第26-27页
   ·研究目的和意义第27-28页
2 材料和方法第28-46页
   ·试验材料第28-31页
     ·菌种和质粒第28页
     ·主要试剂第28页
     ·主要仪器第28-29页
     ·培养基和抗生素第29页
     ·蛋白表达和纯化相关试剂第29-30页
     ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blotting相关试剂第30页
     ·ELISA相关试剂第30-31页
     ·明胶酶谱及酶活测定相关试剂第31页
   ·实验方法第31-46页
     ·菌株培养以及细胞株的传代第31-32页
     ·构建表达载体以及重组蛋白的表达和纯化、酶活反应检测与相关指标测定以及体外促进炎症因子释放。第32-44页
     ·以SC19 为背景菌株构建Abpb突变株第44页
     ·SC19 与 Δabpb对表皮细胞系Hep-2 细胞的粘附实验第44-45页
     ·人工感染小鼠第45-46页
3 结果与分析第46-65页
   ·生物信息学分析结果第46-47页
   ·Abpb蛋白在原核表达系统的重组表达以及利用AKTA-FPLC系统和Ni-NTA树脂的纯化。第47-49页
   ·Abpb重组蛋白蛋白酶特性的确立以及精氨酸肽酶特性的检测和蛋白酶酶活指标Vmax和Km的测定以及最适pH的检测。第49-51页
   ·Abpb蛋白酶具有较高的免疫原性特性,能在小鼠模型上给予很好的被动攻毒保护效果。第51-53页
   ·Abpb基因表达的亚细胞定位第53-55页
   ·Abpb蛋白体外促进巨噬细胞释放炎性因子第55-56页
   ·以SC19 为背景菌株构建Abpb基因突变株第56-58页
   ·突变株△Abpb与野生菌SC19 毒力差异比较,突变株显示出致弱的毒力表型第58-59页
   ·突变株表现出下降的对表皮细胞的粘附能力,和致弱的抗原代巨噬细胞的吞噬杀伤能力。第59-62页
   ·突变株△Abpb和野生菌株SC19 体内共感染实验第62-65页
4 讨论第65-67页
5 结论第67-68页
参考文献第68-81页
附录第81-82页
致谢第82-83页

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