| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-20页 |
| 1 国内外研究进展 | 第10-18页 |
| ·植物生长素及其作用 | 第10页 |
| ·生长素检测技术 | 第10-12页 |
| ·生长素信号转导 | 第12-15页 |
| ·生长素信号途径 | 第12-13页 |
| ·生长素转录抑制蛋白Aux/IAA | 第13页 |
| ·生长素受体TIR1 | 第13-15页 |
| ·重组蛋白表达系统 | 第15-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第15-16页 |
| ·昆虫表达系统 | 第16-17页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第17-18页 |
| 2 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 3 本研究的总体思路 | 第19-20页 |
| 第二章 IAA7和TIR1的原核表达及其分离纯化 | 第20-42页 |
| 1 材料与方法 | 第20-28页 |
| ·相关材料 | 第20页 |
| ·IAA7和TIR1的克隆 | 第20-23页 |
| ·拟南芥RNA提取及反转录 | 第20-21页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·目的基因获得 | 第22-23页 |
| ·重组质粒构建及转化 | 第23-27页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·IAA7和TIR1目的基因的T克隆 | 第24-26页 |
| ·IAA7和TIR1原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第27页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第27页 |
| ·重组蛋白原核表达条件的优化 | 第27页 |
| ·重组蛋白的分离与纯化 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第28-31页 |
| ·获得高质量总RNA | 第28-29页 |
| ·获得目的基因 | 第29-31页 |
| ·成功构建IAA7和TIR1的原核表达载体 | 第31页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第31-36页 |
| ·重组蛋白在不同菌株中的表达 | 第31-33页 |
| ·诱导温度对重组蛋白表达量的影响 | 第33-34页 |
| ·诱导剂浓度对重组蛋白表达量的影响 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的定量 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第36-38页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·IAA7蛋白的分离 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的稳定性分析 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-42页 |
| ·重组蛋白的原核表达与纯化 | 第39-40页 |
| ·影响重组蛋白稳定性的因素 | 第40-42页 |
| 第三章 IAA7和TIR1重组蛋白在昆虫表达系统中的表达 | 第42-54页 |
| 1 材料与方法 | 第42-47页 |
| ·相关材料 | 第42页 |
| ·果蝇S2胚胎细胞的培养 | 第42-43页 |
| ·培养基及主要缓冲液 | 第42页 |
| ·S2细胞的复苏 | 第42页 |
| ·S2细胞的传代培养 | 第42-43页 |
| ·S2细胞的保存 | 第43页 |
| ·重组质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·引物设计 | 第43-44页 |
| ·目的基因获得 | 第44页 |
| ·IAA7和TIR1目的基因的T克隆 | 第44页 |
| ·IAA7和TIR1真核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·重组质粒转染S2细胞,筛选稳定细胞株 | 第45-46页 |
| ·大量提质粒 | 第45页 |
| ·重组质粒共转染S2细胞与筛选稳定细胞系 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-52页 |
| ·S2果蝇胚胎细胞的培养条件优化 | 第47-48页 |
| ·培养方式对细胞生长的影响 | 第47页 |
| ·胎牛血清对细胞生长的影响 | 第47-48页 |
| ·重组载体的构建及鉴定 | 第48-50页 |
| ·获得IAA7和TIR1目的基因 | 第48-49页 |
| ·成功构建IAA7和TIR1的真核表达载体 | 第49-50页 |
| ·获得稳定共转染的IAA7细胞株系 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第51-52页 |
| ·IAA7重组蛋白的表达与纯化 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| ·S2果蝇细胞表达系统的优点 | 第52-53页 |
| ·影响S2胚胎细胞外源蛋白表达的因素 | 第53-54页 |
| 第四章 全文总结及后续研究设想 | 第54-56页 |
| 1 全文总结 | 第54页 |
| 2 特色及创新 | 第54-55页 |
| 3 后续研究设想 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |