| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 1. 导论 | 第8-28页 |
| ·小分子RNA的种类 | 第8-10页 |
| ·植物miRNA的研究进展 | 第10-18页 |
| ·植物miRNA的起源与进化 | 第11-13页 |
| ·植物miRNA的生物合成 | 第13-14页 |
| ·植物miRNA的特点 | 第14-15页 |
| ·植物miRNA的作用机理 | 第15-16页 |
| ·植物miRNA的研究方法 | 第16-18页 |
| ·水稻microRNA的研究状况 | 第18-20页 |
| ·水稻miRNA的鉴定 | 第18页 |
| ·水稻miRNA的生物学功能 | 第18-20页 |
| ·花期相关miRNA的研究进展 | 第20-27页 |
| ·调控水稻花期的光周期途径 | 第21-24页 |
| ·已知的花期相关miRNA | 第24-26页 |
| ·水稻花期相关miRNA研究进展 | 第26-27页 |
| ·研究的目的意义 | 第27-28页 |
| 2. 普通野生稻花期相关miRNA前体的克隆 | 第28-34页 |
| ·供试材料 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·试剂与仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-30页 |
| ·普通野生稻总RNA的提取与纯化 | 第28-29页 |
| ·DNA的提取与纯化 | 第29-30页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第30页 |
| ·野生稻中特异的花期相关miRNA的克隆 | 第30-34页 |
| ·本实验所用的引物 | 第30-31页 |
| ·目的基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第32页 |
| ·PCR扩增产物的连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌(E.coli)感受态细胞(DH5α)的制备与转化 | 第32-34页 |
| 3. 植物表达载体的构建 | 第34-37页 |
| ·试剂的配制 | 第34页 |
| ·pCAMBIA 3301质粒的提取 | 第34页 |
| ·酶切 | 第34-35页 |
| ·电泳及目的片段回收 | 第35页 |
| ·pCAMBIA3301载体骨架和miRNA前体基因的连接 | 第35页 |
| ·热激法转化大肠杆菌(E.coli)感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·酶切验证 | 第36页 |
| ·农杆菌(LBA4404)感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·冻融法转化农杆菌(LBA4404)感受态细胞 | 第36页 |
| ·菌种保存 | 第36-37页 |
| 4. 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第37-42页 |
| ·拟南芥基因转化方法 | 第37-38页 |
| ·转化拟南芥的步骤 | 第38页 |
| ·转基因拟南芥的筛选鉴定 | 第38-40页 |
| ·拟南芥T_0代种子的筛选 | 第38页 |
| ·转基因拟南芥PCR鉴定 | 第38-40页 |
| ·转基因拟南芥的表型鉴定 | 第40页 |
| ·转基因拟南芥中miRNA的茎环RT-PCR检测 | 第40-41页 |
| ·转基因拟南芥中miRNA靶基因表达的qRT-PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 5. 实验结果与分析 | 第42-58页 |
| ·普通野生稻开花相关miRNA前体基因表达载体的PCR鉴定 | 第42-45页 |
| ·预测miRNA前体基因所形成的茎环结构 | 第45-47页 |
| ·农杆菌介导的花序浸染法转化拟南芥 | 第47页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第47-48页 |
| ·转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第48页 |
| ·转基因拟南芥与野生型拟南芥的表型观察与比较 | 第48-53页 |
| ·转化植株与野生型植株首次开花时莲座叶数的比较 | 第48-51页 |
| ·转化植株与野生型植株首次抽薹所需天数的比较 | 第51-53页 |
| ·转miRNA160f拟南芥的鉴定 | 第53-54页 |
| ·转基因拟南芥miRNA160f靶基因的表达分析 | 第54-58页 |
| 6. 讨论 | 第58-60页 |
| 7. 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
