| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| ·miRNA | 第12-16页 |
| ·miRNA 的发现及其研究进展 | 第12页 |
| ·miRNA 的特征 | 第12-14页 |
| ·miRNA 的生物合成途径 | 第14-16页 |
| ·miRNA 的作用机制 | 第16页 |
| ·miRNA 的生物学功能 | 第16-20页 |
| ·miRNA 在植物生长发育中的作用 | 第17-19页 |
| ·miRNA 在动物中的作用 | 第19-20页 |
| ·植物 miRNA 的分离和鉴定 | 第20-22页 |
| ·植物 miRNA 的分离 | 第20-21页 |
| ·植物 miRNA 的鉴定 | 第21-22页 |
| ·植物 miRNA 靶基因的预测及鉴定 | 第22页 |
| ·miRNA171 及靶基因的研究现状 | 第22-23页 |
| ·立题依据 | 第23-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-44页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·溶液配制 | 第27-28页 |
| ·主要的生物信息学分析软件和网站 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-44页 |
| ·植物总 DNA 提取 | 第28-29页 |
| ·植物总 RNA 提取 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR 方法 | 第30-31页 |
| ·目的片断的克隆与纯化 | 第31-32页 |
| ·DNA 片断的回收和连接 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备、转化和筛选 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·过表达载体的连接 | 第35-36页 |
| ·农杆菌感受态的制备、转化和筛选 | 第36-37页 |
| ·拟南芥遗传转化及转基因植株的筛选 | 第37-38页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第38-39页 |
| ·烟草瞬时转化 | 第39-40页 |
| ·拟南芥内源叶绿素含量的测定 | 第40页 |
| ·生长发育的表型观察 | 第40-41页 |
| ·双光子激光扫描显微镜观察 | 第41页 |
| ·拟南芥 miRNA171 artificial microRNAs 载体的构建 | 第41-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-56页 |
| ·高山松 miRNA171a 的序列分析 | 第44-45页 |
| ·目的基因过表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·PedmiRNA171a 前体基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·GRAS 家族成员的克隆 | 第46-47页 |
| ·过表达 PedmiRNA171a 纯合体植株的鉴定 | 第47-48页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析 PedmiRNA171a 及靶基因的表达量 | 第48-50页 |
| ·总 RNA 的提取和鉴定 | 第48页 |
| ·转基因植株中 PedmiRNA171a 表达量的鉴定 | 第48-49页 |
| ·转基因植株中 PedmiRNA171a 对靶基因 GRAS 家族成员的影响 | 第49-50页 |
| ·体外验证 PedmiRNA171a 对靶基因的切割作用 | 第50-51页 |
| ·过表达 PedmiRNA171a 影响拟南芥内源叶绿素含量 | 第51-52页 |
| ·转基因植株表型的观察 | 第52-53页 |
| ·转基因植株的株高 | 第52页 |
| ·转基因植株的主根 | 第52-53页 |
| ·转基因植株的花期 | 第53页 |
| ·转基因植株的内吞 | 第53-54页 |
| ·miRNA171a artificial microRNAs 载体的构建 | 第54-55页 |
| ·其它载体的构建 | 第55-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第70-71页 |
