重组人血清白蛋白制备及双抗体夹心ELISA方法的建立
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词英文对照表 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 1. HSA生物学概述 | 第13-18页 |
| ·HSA的起源和进化 | 第13页 |
| ·HSA的分布与含量 | 第13页 |
| ·HSA的理化特性 | 第13-14页 |
| ·HSA的结构特征 | 第14-15页 |
| ·HSA的合成 | 第15页 |
| ·HSA的代谢 | 第15页 |
| ·HSA基因 | 第15页 |
| ·HSA的生物功能及应用 | 第15-17页 |
| ·HSA的国内外现有份额和市场前景分析 | 第17页 |
| ·开发重组人血清白蛋白的必要性 | 第17-18页 |
| 2. rHSA的表达研究进展 | 第18-20页 |
| ·原核表达系统表达rHSA | 第18页 |
| ·真核酵母表达系统表达rHSA | 第18-20页 |
| ·植物表达系统表达rHSA | 第20页 |
| ·动物表达系统表达rHSA | 第20页 |
| 3. 酶联免疫吸附试验技术 | 第20-22页 |
| ·ELISA方法的基本原理 | 第20-21页 |
| ·ELISA方法的分类 | 第21-22页 |
| ·新型ELISA检测方法 | 第22页 |
| 4. 本论文的研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 试验研究 | 第23-55页 |
| 第一章 HSA基因的克隆及原核表达 | 第23-38页 |
| 1. 材料及仪器设备 | 第23-24页 |
| ·主要材料 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·仪器设备 | 第23-24页 |
| 2. 试验步骤和方法 | 第24-32页 |
| ·HSA的生物信息学分析 | 第24页 |
| ·HSA基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·构建重组克隆载体pMD18T-rHSA | 第27-28页 |
| ·构建重组表达载体pGEX-4T-1-rHSA | 第28-30页 |
| ·rHSA的诱导表达及鉴定 | 第30-32页 |
| 3. 试验结果 | 第32-37页 |
| ·HSA的生物信息学分析结果 | 第32-33页 |
| ·HSA基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体pGEX-4T-1-rHSA的鉴定 | 第34-36页 |
| ·pGEX-4T-1-rHSA的诱导表达及鉴定 | 第36-37页 |
| 4. 小结与分析 | 第37-38页 |
| 第二章 HSA多克隆抗体的制备及纯化 | 第38-47页 |
| 1. 材料及仪器设备 | 第38-39页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·材料及试剂 | 第38页 |
| ·仪器设备 | 第38-39页 |
| 2. 试验步骤及方法 | 第39-43页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·兔抗HSA的制备 | 第40-41页 |
| ·兔抗HSA的纯化 | 第41-42页 |
| ·纯化的兔抗HSA的鉴定 | 第42-43页 |
| 3. 试验结果 | 第43-46页 |
| ·rHSA的纯化 | 第43-44页 |
| ·兔抗HSA抗血清的纯化 | 第44-45页 |
| ·兔抗HSA抗血清的鉴定 | 第45-46页 |
| 4. 小结与分析 | 第46-47页 |
| 第三章 HSA双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第47-55页 |
| 1. 材料及仪器设备 | 第47-48页 |
| ·材料及试剂 | 第47页 |
| ·仪器设备 | 第47页 |
| ·主要溶液 | 第47-48页 |
| 2. 试验步骤及方法 | 第48-49页 |
| ·HSA双抗体夹心ELISA法建立 | 第48-49页 |
| ·建立的HSA双抗体夹心ELISA法的质量评价 | 第49页 |
| 3. 试验结果 | 第49-54页 |
| ·最适包被浓度确定 | 第49-50页 |
| ·最适封闭液选择 | 第50页 |
| ·最适酶标抗体浓度的确定 | 第50-51页 |
| ·最适样品反应时间的确定 | 第51页 |
| ·酶标抗体最佳作用时间优化 | 第51-52页 |
| ·最佳显色时间优化 | 第52页 |
| ·特异性分析 | 第52-53页 |
| ·精密性分析 | 第53页 |
| ·与直接ELISA法比较 | 第53-54页 |
| 4. 小结与分析 | 第54-55页 |
| 第三部分 结论 | 第55-56页 |
| 1. HSA基因的克隆及原核表达 | 第55页 |
| 2. HSA多克隆抗体的制备及纯化 | 第55页 |
| 3. HSA双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 1. HSA的氨基酸序列 | 第60页 |
| 2. 作者简介 | 第60页 |
| 3. 硕士期间已发表论文 | 第60-61页 |
| 4. 硕士期间参与的课题研究 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
