| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 绪论 | 第9-17页 |
| ·CTSL 蛋白的分子结构特点 | 第10-11页 |
| ·组织蛋白酶 L 的分类 | 第10页 |
| ·组织蛋白酶 L 的合成及转运 | 第10-11页 |
| ·组织蛋白酶 L 的激活 | 第11页 |
| ·组织蛋白酶 L 的结构 | 第11-12页 |
| ·组织蛋白酶 L 的一级结构 | 第11页 |
| ·组织蛋白酶 L 的空间结构 | 第11-12页 |
| ·组织蛋白酶 L 在生理和病理活动中的作用 | 第12-14页 |
| ·组织蛋白酶 L 在生理活动中的作用 | 第12-14页 |
| ·组织蛋白酶 L 在病理活动中的作用 | 第14页 |
| ·组织蛋白酶 L 在寄生动物中的作用 | 第14-15页 |
| ·总结与展望 | 第15-17页 |
| 2 日本七鳃鳗组织蛋白酶 L 基因的分子克隆 | 第17-35页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·实验材料 | 第17页 |
| ·仪器设备 | 第17-18页 |
| ·药品及试剂 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-30页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·口腔腺总 RNA 的提取 | 第18-20页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第20页 |
| ·CTSL 片段 cDNA 扩增 | 第20-21页 |
| ·目的片段的回收 | 第21-22页 |
| ·目的片段与载体连接及转化 | 第22页 |
| ·阳性菌落的鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的提取及测序 | 第23-24页 |
| ·cDNA5’末端全长快速扩增反应(5’ RACE) | 第24-27页 |
| ·cDNA3’末端全长快速扩增反应(3’ RACE) | 第27-29页 |
| ·3’RACE 和 5’ RACE 重组质粒的获取和鉴定 | 第29页 |
| ·3’RACE 实验和 5’ RACE 实验所得的序列拼接 | 第29-30页 |
| ·结果 | 第30-33页 |
| ·口腔腺总 RNA 的提取 | 第30页 |
| ·日本七鳃鳗组织蛋白酶 L 基因的全长扩增 | 第30-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 3 Lj-CTSL 编码氨基酸序列生物信息学分析 | 第35-49页 |
| ·分析所用的在线网站和软件 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-46页 |
| ·一级结构分析 | 第35-39页 |
| ·功能结构域预测 | 第39-40页 |
| ·二级结构预测 | 第40-41页 |
| ·三级结构模拟 | 第41-42页 |
| ·同源序列比对 | 第42-44页 |
| ·保守性分析 | 第44-45页 |
| ·系统发育分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-49页 |
| 4 日本七鳃鳗 Lj-CTSL 基因表达、蛋白纯化 | 第49-61页 |
| ·半定量 RT-PCR 法检测 Lj-CTSL 的表达 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·结果 | 第51-52页 |
| ·日本七鳃鳗 Lj-CTSL 基因原核表达及重组蛋白纯化 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-57页 |
| ·结果 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 5 重组蛋白 rLj-CTSL 功能的初步探究 | 第61-67页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-62页 |
| ·细胞培养 | 第61页 |
| ·细胞增殖实验 | 第61页 |
| ·血管新生实验 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-65页 |
| ·rLj-CTSL 对 MA、HUVEC 和 ECV304 细胞增殖的抑制作用 | 第62-64页 |
| ·rLj-CTSL 对 bFGF 诱导的鸡绒毛尿囊膜（CAM）血管新生的抑制作用 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 6 结论 | 第67-68页 |
| 本论文的创新点 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录 A 不同物种的 CTSL 的 FASTA 格式氨基酸序列 | 第73-75页 |
| 附录 B 表达载体 pTWIN1 质粒图谱 | 第75-76页 |
| 附录 C 蛋白质浓度测定标准曲线 | 第76-77页 |
| 研究生期间发表文章及研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
