| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-20页 |
| 第一章 引言 | 第20-46页 |
| ·华北大黑鳃金龟的研究概况 | 第20-24页 |
| ·华北大黑鳃金龟的发生规律及危害概况 | 第20-21页 |
| ·华北大黑鳃金龟的生物学特性 | 第21-22页 |
| ·华北大黑鳃金龟的防治 | 第22-24页 |
| ·化学通信对植食性昆虫行为的影响 | 第24-28页 |
| ·植物挥发性次生化合物对植食性昆虫寄主选择行为的影响 | 第24-26页 |
| ·昆虫性信息素对植食性昆虫行为的影响 | 第26-27页 |
| ·金龟子信息素的应用研究 | 第27-28页 |
| ·昆虫触角感器 | 第28-29页 |
| ·昆虫触角感器的类型和结构 | 第28-29页 |
| ·金龟子触角感器的研究 | 第29页 |
| ·昆虫嗅觉的化学感受 | 第29-37页 |
| ·昆虫嗅觉识别的一般过程 | 第30-31页 |
| ·气味结合蛋白 | 第31-34页 |
| ·昆虫嗅觉编码涉及的其他重要蛋白 | 第34-36页 |
| ·金龟子气味结合蛋白的研究进展 | 第36-37页 |
| ·嗅觉蛋白互作机制研究进展 | 第37-38页 |
| ·离子通道假说 | 第37页 |
| ·嗅觉蛋白互作机制 | 第37-38页 |
| ·酵母双杂交技术在互作组学中的研究进展 | 第38-44页 |
| ·互作组学在系统生物学中的重要性 | 第38页 |
| ·蛋白质-蛋白质互作的筛选技术 | 第38页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第38-44页 |
| ·研究目的和意义 | 第44-46页 |
| ·研究的目的和意义 | 第44-45页 |
| ·研究的内容 | 第45-46页 |
| 第二章 华北大黑鳃金龟 OBP3 和 OBP4 基因克隆及表达载体构建 | 第46-56页 |
| ·材料与方法 | 第46-52页 |
| ·供试虫源 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·仪器设备 | 第47页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| ·总 RNA 提取 | 第48页 |
| ·反转录合成 cDNA 第一链 | 第48-49页 |
| ·利用特异性引物 PCR 扩增 | 第49页 |
| ·对 PCR 产物回收 | 第49-50页 |
| ·PCR 产物连接 T 载体 | 第50页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞以及阳性克隆验证 | 第50页 |
| ·质粒提取 | 第50-51页 |
| ·双酶切检测插入片段 | 第51页 |
| ·原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-55页 |
| ·华北大黑鳃金龟触角总 RNA 检测 | 第52页 |
| ·HoblOBP3 和 HoblOBP4 序列扩增 | 第52-53页 |
| ·HoblOBP3 和 HoblOBP4 重组 pGEM-T 质粒 PCR 检测 | 第53页 |
| ·pGEM-T 重组质粒酶切检测 | 第53-54页 |
| ·HoblOBP3 和 HoblOBP4 原核表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 第三章 华北大黑鳃金龟嗅觉相关蛋白原核表达以及结合特征研究 | 第56-87页 |
| ·材料与方法 | 第56-66页 |
| ·同源建模分析 | 第56-57页 |
| ·主要试剂 | 第57-59页 |
| ·仪器设备 | 第59-60页 |
| ·原核表达 | 第60页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第60-61页 |
| ·电转印 | 第61页 |
| ·Western blot | 第61-62页 |
| ·蛋白纯化 | 第62-63页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第63-64页 |
| ·透析以及超滤处理 | 第64页 |
| ·纯化蛋白的获得 | 第64-65页 |
| ·荧光结合分析 | 第65页 |
| ·混合蛋白的荧光结合分析 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-84页 |
| ·华北大黑鳃金龟 HoblOBP3 和 HoblOBP4 同源建模 | 第66-70页 |
| ·嗅觉相关蛋白表达评价 | 第70-72页 |
| ·嗅觉相关蛋白纯化评价 | 第72-74页 |
| ·HoblOBP3 和 HoblOBP4 荧光结合实验 | 第74-79页 |
| ·混合蛋白的结合特征分析 | 第79-82页 |
| ·混合蛋白的竞争结合分析 | 第82-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| 第四章 华北大黑鳃金龟气味结合蛋白触角感器共定位研究 | 第87-93页 |
| ·材料与方法 | 第87-89页 |
| ·主要试剂 | 第87-88页 |
| ·仪器设备 | 第88页 |
| ·免疫共定位的样品制备 | 第88-89页 |
| ·结果与分析 | 第89-92页 |
| ·华北大黑鳃金龟 HoblOBP1 和 HoblOBP2 免疫共定位分析 | 第89-91页 |
| ·华北大黑鳃金龟 HoblOBP2 和 HoblOBP4 免疫共定位分析 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-93页 |
| 第五章 华北大黑鳃金龟触角酵母双杂交均一化 cDNA 文库构建 | 第93-109页 |
| ·材料与方法 | 第93-102页 |
| ·供试虫源 | 第93页 |
| ·主要试剂 | 第93-94页 |
| ·仪器设备 | 第94页 |
| ·总 RNA 提取 | 第94页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第94页 |
| ·PCR 扩增合成 ds cDNA | 第94-95页 |
| ·ds cDNA 全长准备 | 第95-96页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第96页 |
| ·ds cDNA 杂交 | 第96-98页 |
| ·均一化 cDNA 第一次扩增 | 第98页 |
| ·均一化 cDNA 第二次扩增 | 第98-99页 |
| ·SfiI 酶切和 cDNA 片段分级 | 第99-100页 |
| ·SfiI 酶切文库载体 pPR3-N | 第100页 |
| ·cDNA 与文库载体连接 | 第100页 |
| ·连接产物转化到大肠杆菌的转化测试 | 第100-101页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌大规模扩增 | 第101页 |
| ·文库收集以及甘油保存 | 第101-102页 |
| ·文库质粒提取 | 第102页 |
| ·结果与分析 | 第102-107页 |
| ·华北大黑鳃金龟触角总 RNA 检测 | 第102-103页 |
| ·PCR 扩增合成 ds cDNA | 第103-104页 |
| ·均一化 NORMALIZER enzyme 活性测试 | 第104页 |
| ·均一化处理 ds cDNA 后的第 1 次 PCR 扩增 | 第104-106页 |
| ·均一化 cDNA 第 2 次 PCR 扩增 | 第106页 |
| ·SfiI 酶切文库载体 pPR3-N 和 cDNA | 第106-107页 |
| ·文库质量检测 | 第107页 |
| ·讨论 | 第107-109页 |
| 第六章 酵母双杂交筛选华北大黑鳃金龟触角均一化 cDNA 文库 | 第109-138页 |
| ·材料与方法 | 第109-124页 |
| ·主要试剂 | 第109-110页 |
| ·仪器设备 | 第110页 |
| ·培养基制备 | 第110-113页 |
| ·酵母双杂交载体信息 | 第113页 |
| ·质粒和菌株的处理和保存 | 第113-115页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第115页 |
| ·诱饵载体转入酵母菌 NMY51 | 第115-116页 |
| ·免疫印记验证诱饵表达 | 第116-117页 |
| ·DUALhunter 系统功能验证 | 第117-119页 |
| ·用 3-AT 优化筛选的条件 | 第119-121页 |
| ·文库转化和互作物选择 | 第121-122页 |
| ·酵母提质粒并重新转化大肠杆菌鉴定 | 第122-123页 |
| ·-半乳糖苷酶活性检测 | 第123-124页 |
| ·结果与分析 | 第124-135页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第124-125页 |
| ·诱饵载体转入酵母菌 NMY51 | 第125-126页 |
| ·诱饵载体表达验证 | 第126-127页 |
| ·DUALhunter 系统的功能验证 | 第127-128页 |
| ·用 3-AT 优化筛选的条件 | 第128-130页 |
| ·文库筛选和互作物选择 | 第130页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第130-134页 |
| ·-半乳糖苷酶活性检测 | 第134-135页 |
| ·讨论 | 第135-138页 |
| 第七章 全文结论 | 第138-141页 |
| ·结论 | 第138-139页 |
| ·OBP3 和 OBP4 基因克隆以及表达载体构建 | 第138页 |
| ·华北大黑鳃金龟嗅觉相关蛋白原核表达以及结合特征研究 | 第138-139页 |
| ·华北大黑鳃金龟气味结合蛋白触角共定位的研究 | 第139页 |
| ·触角酵母双杂交均一化 cDNA 文库构建 | 第139页 |
| ·酵母双杂交筛选华北大黑鳃金龟触角均一化 cDNA 文库 | 第139页 |
| ·创新点 | 第139-140页 |
| ·展望 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-160页 |
| 致谢 | 第160-162页 |
| 作者简历 | 第162页 |
