| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| ·纹枯病菌(RICE SHEATH BLIGHT DISEASE PATHOGEN)与水稻纹枯病(RICE SHEATH BLIGHT DISEASE)研究现状简介 | 第11页 |
| ·病原微生物效应因子与植株互作的研究 | 第11-23页 |
| ·植株的免疫系统 | 第13-17页 |
| ·效应因子的定义及其相关术语 | 第17-19页 |
| ·几种常见的丝状真菌效应因子 | 第19-23页 |
| ·立题依据及研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-44页 |
| ·材料 | 第24-29页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·纹枯病菌材料 | 第24-25页 |
| ·细菌菌株与载体 | 第25页 |
| ·瞬时表达质粒与稳定表达质粒 | 第25页 |
| ·敲除载体 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·抗生素与激素 | 第26页 |
| ·生化试剂 | 第26-27页 |
| ·主要实验试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27-28页 |
| ·验证效应因子所需的PCR引物 | 第28-29页 |
| ·主要研究方法 | 第29-44页 |
| ·纹枯病菌的培养 | 第29页 |
| ·纹枯病菌总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·纹枯病菌总RNA反转录成cDNA | 第30-31页 |
| ·纹枯病菌效应因子基因编码序列的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳及回收 | 第32-33页 |
| ·编码序列克隆载体的获得 | 第33页 |
| ·大肠杆菌转化和菌液PCR筛选阳性克隆及基因的测序 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第34页 |
| ·酶切反应 | 第34-35页 |
| ·酶切产物与表达载体的连接反应及表达菌株的获得 | 第35-36页 |
| ·效应因子原核表达菌株的诱导表达 | 第36页 |
| ·蛋白质的SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| ·效应因子粗蛋白产物的获得 | 第37页 |
| ·效应因子粗蛋白产物对离体水稻、玉米叶片的致病性鉴定 | 第37页 |
| ·效应因子对水稻核心种质库群体的侵染鉴定 | 第37-38页 |
| ·效应因子蛋白的纯化 | 第38页 |
| ·效应因子纯蛋白对水稻叶片的侵染 | 第38页 |
| ·水稻无菌苗的培育 | 第38-39页 |
| ·水稻原生质体的提取 | 第39页 |
| ·酶切产物与瞬时表达载体的连接 | 第39-40页 |
| ·瞬时表达载体转化大肠杆菌克隆感受态及测序并酶切鉴定 | 第40页 |
| ·大提质粒 | 第40-41页 |
| ·PEG法介导瞬时表达载体转化水稻原生质体 | 第41页 |
| ·荧光共聚焦显微镜观察原生质体内、的发光部位 | 第41页 |
| ·水稻幼苗的培养 | 第41-42页 |
| ·酶切产物与稳定表达载体的连接 | 第42页 |
| ·稳定表达转化大肠杆菌克隆感受态及筛选阳性克隆并测序 | 第42页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第42-43页 |
| ·稳定表达质粒转化农杆菌 | 第43页 |
| ·阳性转化子的筛选及鉴定 | 第43-44页 |
| ·农杆菌介导稳定表达载体转化水稻植株 | 第44页 |
| ·效应因子基因非功能域编码序列的PCR扩增 | 第44页 |
| ·目的基因与敲除载体的连接 | 第44页 |
| ·敲除载体转化农杆菌和阳性转化子的筛选及鉴定 | 第44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-69页 |
| ·原核表达载体的构建及致病性鉴定 | 第44-60页 |
| ·纹枯病菌总RNA的提取及反转录 | 第44-46页 |
| ·纹枯病菌效应因子基因编码序列的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·效应因子原核表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·效应因子蛋白的SDS-PAGE电泳图及纯化结果电泳图和峰图 | 第49-55页 |
| ·效应因子粗蛋白产物对水稻、玉米叶片的致病性鉴定 | 第55-56页 |
| ·效应因子对水稻核心种质库群体的侵染鉴定 | 第56-58页 |
| ·效应因子纯蛋白对水稻叶片的侵染 | 第58-60页 |
| ·瞬时表达载体的构建及亚细胞定位 | 第60-65页 |
| ·瞬时表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·荧光共聚焦激光扫描显微镜观察效应因子的亚细胞定位 | 第61-65页 |
| ·稳定表达载体的构建及对水稻植株的转化 | 第65-67页 |
| ·稳定表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·农杆菌介导稳定表达载体侵染水稻植株 | 第66-67页 |
| ·同源重组法敲除载体的构建 | 第67-69页 |
| ·敲除载体的构建 | 第67-69页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第69-72页 |
| ·效应因子的原核表达及表达产物对植株的侵染 | 第69-70页 |
| ·效应因子的瞬时表达及亚细胞定位 | 第70页 |
| ·效应因子的稳定表达及表达载体对水稻植株、愈伤和枯病菌低度菌株、非致病性菌株的转化 | 第70-71页 |
| ·致病菌株中效应因子基因的敲除 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 附录 | 第81-87页 |
| 1. 效应因子005473的氨基酸序列 | 第81页 |
| 2. 效应因子008560的氨基酸序列 | 第81-82页 |
| 3. 原核表达载体PMAL-C2X | 第82-83页 |
| 4. 原核表达载体PGEX-4T-1 | 第83-84页 |
| 5. 稳定表达载体PHB | 第84-85页 |
| 6. 瞬时表达载体PA7-YFP | 第85-86页 |
| 7. 敲除载体PSH75 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 在读期间科研论文发表情况 | 第88页 |
