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小麦Na~+/H~+逆转运蛋白TaNHX2的功能验证及功能域分析

致谢第1-9页
摘要第9-11页
1 文献综述第11-28页
   ·土壤盐渍化及其危害第11-13页
     ·土壤盐渍化第11页
     ·土壤盐渍化对植物的危害第11-13页
       ·渗透胁迫第12页
       ·离子胁迫第12-13页
       ·营养胁迫第13页
   ·植物耐盐机理第13-18页
     ·拒盐第14-15页
     ·降低细胞内的盐浓度第15-16页
       ·Na~+区隔化第15-16页
       ·Na~+外排第16页
     ·有机溶质或渗透保护剂的积累第16-18页
       ·脯氨酸第17页
       ·甜菜碱第17页
       ·多元醇第17-18页
       ·多胺第18页
   ·Na~+/H~+逆向转运蛋白第18-26页
     ·SOS 调控途径第20-22页
       ·SOS1 基因第20-21页
       ·SOS2 基因第21页
       ·SOS3 基因第21-22页
     ·NHX 调控途径第22-25页
       ·NHX 基因的发现第22-23页
       ·NHX 基因的分类第23-24页
       ·NHX 基因的研究进展第24-25页
     ·Na~+/H~+逆向转运蛋白与植物耐盐性第25-26页
       ·盐胁迫与 Na~+/H~+逆向转运蛋白活性第25-26页
       ·其它胁迫与Na~+/H~+逆向转运蛋白活性第26页
       ·转Na~+/H~+逆向转运蛋白基因植株与其耐盐性第26页
   ·小麦Na~+/H~+逆向转运蛋白第26-28页
     ·TaSOS1 基因第27页
     ·小麦NHX 基因第27-28页
2 引言第28-30页
3 材料与方法第30-40页
   ·试验材料第30页
     ·植物材料及处理第30页
     ·试验材料第30页
   ·试验方法第30-40页
     ·RNA 提取第30-31页
     ·反转录反应第31页
     ·TaNHX2 基因的克隆第31-33页
       ·引物设计第31页
       ·PCR 反应体系及条件第31-32页
       ·大肠杆菌感受态的制备第32-33页
       ·连接产物的转化第33页
       ·大肠杆菌质粒DNA 的提取第33页
     ·TaNHX2 基因的功能验证第33-37页
       ·酵母表达载体的构建第33-34页
       ·重组质粒DNA 提取第34页
       ·重组质粒DNA 的检测第34-35页
       ·试验中所需酵母培养基第35页
       ·LiAc 法转化酵母第35-36页
       ·酵母质粒DNA 提取第36页
       ·酵母质粒DNA PCR 检测及酶切检测第36页
       ·酵母功能互补试验第36-37页
       ·转基因酵母离子含量测定第37页
     ·TaNHX2 基因的定位第37-38页
       ·定位重组载体的构建第37页
       ·拟南芥原生质体制备第37-38页
       ·PEG 法转化拟南芥原生质体第38页
       ·激光共聚焦显微镜检测第38页
     ·实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)第38-39页
       ·荧光定量PCR 引物第38页
       ·实时荧光定量PCR第38-39页
     ·TaNHX2 突变体基因的功能验证第39-40页
       ·TaNHX2 突变体基因的克隆第39-40页
       ·TaNHX2 突变体酵母表达载体的构建第40页
       ·酵母功能互补试验第40页
4 结果与分析第40-53页
   ·TaNHX2 基因的克隆及生物信息学分析第40-42页
     ·TaNHX2 基因的克隆第40-41页
     ·TaNHX2 基因的生物信息学分析第41-42页
   ·转TaNHX2 基因酵母的功能互补验证第42-44页
     ·pYES2-TaNHX2 重组质粒的构建第43页
     ·转基因酵母功能验证第43-44页
   ·转TaNHX2 基因酵母细胞的离子含量测定第44-45页
   ·TaNHX2 基因的定位第45-46页
   ·TaNHX2 基因在各种胁迫下的表达量分析第46-50页
     ·RNA 及cDNA 检测第46-47页
     ·标准曲线的建立第47页
     ·熔解曲线第47-48页
     ·TaNHX2 基因在各种胁迫下的特异性表达第48-50页
       ·NaCl 胁迫下TaNHX2 基因的表达模式第48-49页
       ·4℃低温胁迫下TaNHX2 基因的表达模式第49页
       ·ABA 胁迫下TaNHX2 基因的表达模式第49-50页
       ·PEG6000 胁迫下TaNHX2 基因的表达模式第50页
   ·TaNHX2 的功能域分析第50-53页
     ·TaNHX2 突变体基因的克隆第50-51页
     ·转TaNHX2 突变体基因酵母的功能互补验证第51-52页
     ·酸性条件对突变体功能影响第52-53页
5 结论与讨论第53-56页
   ·TaNHX2 的生物信息学分析第53页
   ·TaNHX2 的耐盐性分析第53-54页
   ·不同胁迫下TaNHX2 基因的表达第54-55页
   ·TaNHX2 突变体基因耐盐性分析第55-56页
参考文献第56-66页
ABSTRACT第66-68页

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