| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 农业固体废弃物的资源化利用 | 第14-17页 |
| ·农作物秸秆的资源化利用 | 第14-15页 |
| ·畜禽粪便的资源化利用 | 第15-17页 |
| 3 影响堆肥过程的因素及堆肥腐熟度的研究进展 | 第17-26页 |
| ·影响堆肥化进程的因素 | 第17-19页 |
| ·堆肥腐熟度的研究进展 | 第19-26页 |
| 4 堆肥过程中DNA提取方法的研究进展 | 第26-27页 |
| 5 堆肥过程中微生物多样性的研究进展 | 第27-31页 |
| ·传统平板培养法 | 第28页 |
| ·磷脂脂肪酸分析(PLFA)和中性脂肪酸甲酯分析(NLFA) | 第28-29页 |
| ·分子生物学方法 | 第29-31页 |
| 6 研究意义和技术路线 | 第31-33页 |
| ·堆肥研究中存在的问题 | 第31页 |
| ·研究的内容及意义 | 第31-32页 |
| ·研究技术路线 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-38页 |
| 第二章 牛粪高温堆肥过程中的物质变化及其腐熟度评价研究 | 第38-70页 |
| 第一节 牛粪高温堆肥过程中物料的理化性质变化及腐熟度的研究 | 第38-56页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 材料和方法 | 第38-41页 |
| ·堆肥原料及理化性质 | 第38-39页 |
| ·堆肥设备与材料测定仪器 | 第39页 |
| ·堆肥过程及样品采集与保存 | 第39页 |
| ·理化性质的测定 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-53页 |
| ·堆肥过程中原料颜色、气味和颗粒度的变化 | 第41-42页 |
| ·堆肥过程中温度的变化 | 第42-43页 |
| ·堆肥过程中含水率的变化 | 第43-44页 |
| ·挥发性固体物质和灰分变化 | 第44-45页 |
| ·全碳(TC)和全氮(TN)含带的变化 | 第45-47页 |
| ·pH和电导率(EC)的变化 | 第47-48页 |
| ·E_4/E_6的变化 | 第48-49页 |
| ·水溶性有机碳(WSC)的变化 | 第49-50页 |
| ·NH_4~+-N和NO_3~-N的变化 | 第50-52页 |
| ·发芽指数(GI)的变化 | 第52-53页 |
| ·各腐熟指标相关性分析 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 5 小结 | 第54-56页 |
| 第二节 牛粪高温堆肥过程中物料的光谱学特性及腐熟度的研究 | 第56-65页 |
| 1 引言 | 第56页 |
| 2 材料方法 | 第56-58页 |
| ·样品的采集与保存 | 第56页 |
| ·重金属离子的测定 | 第56页 |
| ·三维荧光光谱测定液的制备 | 第56-57页 |
| ·三位荧光光谱的测定 | 第57页 |
| ·红外光谱的测定 | 第57-58页 |
| ·数据处理与分析 | 第58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-63页 |
| ·水溶性重金属离子的含量 | 第58-59页 |
| ·堆肥过程中三维荧光图谱的变化与分析 | 第59-62页 |
| ·牛粪堆肥过程中的红外光谱分析 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 5 小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 第三章 基于分子生态学研究的牛粪高温堆肥基因组DNA的提取与纯化 | 第70-88页 |
| 1 引言 | 第70-71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-76页 |
| ·样品的采集与保存 | 第71页 |
| ·材料和试剂 | 第71页 |
| ·堆肥基因组DNA的提取和纯化 | 第71-72页 |
| ·不同DNA提取方法细胞破壁效果的比较 | 第72-73页 |
| ·DNA和腐殖酸的定量 | 第73页 |
| ·PCR和Real-time PCR检测纯化后DNA样品纯度 | 第73-76页 |
| ·DGGE分析微生物多样性 | 第76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-84页 |
| ·堆肥DNA的提取 | 第76-78页 |
| ·不同DNA提取方法的电泳图谱 | 第78-79页 |
| ·不同DNA提取方法的DNA和腐殖酸含量 | 第79-82页 |
| ·不同提取和纯化方法获得的DNA对PCR和Real-time PCR的影响 | 第82-83页 |
| ·DGGE分析 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-85页 |
| 5 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 第四章 牛粪高温堆肥过程中微生物多样性的研究 | 第88-122页 |
| 第一节 平板培养法和DGGE方法研究牛粪高温堆肥过程中微生物多样性 | 第88-102页 |
| 1 引言 | 第88页 |
| 2 材料和方法 | 第88-90页 |
| ·样品的采集与保存 | 第88页 |
| ·平板计数 | 第88-89页 |
| ·DNA的提取和纯化 | 第89页 |
| ·PCR扩增 | 第89页 |
| ·DGGE分析 | 第89-90页 |
| ·数据分析 | 第90页 |
| 3 结果与分析 | 第90-99页 |
| ·堆肥过程中可培养的常温和高温微生物数量变化 | 第90-91页 |
| ·堆肥样品DNA的提取和纯化 | 第91-92页 |
| ·堆肥样品16S rRNA-V3区的琼脂糖凝胶电泳 | 第92页 |
| ·堆肥样品16S rRNA-V3区的DGGE分析 | 第92-98页 |
| ·三位荧光技术对堆肥过程中微生物种类和数量的评估 | 第98-99页 |
| 4 讨论 | 第99-101页 |
| ·DGGE技术对微生物多样性的研究 | 第99-100页 |
| ·FRI参数对堆肥过程细菌种类的评估 | 第100-101页 |
| 5 小结 | 第101-102页 |
| 第二节 16S rRNA基因组文库的构建研究堆肥过程中微生物多样性 | 第102-122页 |
| 1 引言 | 第102页 |
| 2 材料方法 | 第102-105页 |
| ·样品的采集与保存 | 第102页 |
| ·DNA的提取和纯化 | 第102页 |
| ·PCR扩增和16S rRNA文库的构建 | 第102-104页 |
| ·测序 | 第104-105页 |
| ·16S rRNA序列分析和系统发育树构建 | 第105页 |
| ·16S rRNA Genebank序列登陆号 | 第105页 |
| 3 结果与分析 | 第105-112页 |
| ·克隆文库成功测序克隆数、Coverage C值和丰度曲线比较 | 第105-107页 |
| ·堆肥过程中微生物门和属的组成和变化 | 第107-109页 |
| ·堆肥过程中Shannon-Wienner(H’)指数和OTU变化 | 第109-111页 |
| ·优势OTUs的系统发育树分析 | 第111-112页 |
| 4 讨论 | 第112-117页 |
| ·16S rRNA文库构建对堆肥过程微生物多样性分析 | 第112-113页 |
| ·Proteobacteria | 第113-114页 |
| ·Frimicutes | 第114-115页 |
| ·Actinobacteria | 第115页 |
| ·Bacteroidetes和Chloroflexi | 第115-116页 |
| ·其他微生物门类 | 第116页 |
| ·堆肥过程中微生物多样性的变化 | 第116-117页 |
| 5 小结 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-122页 |
| 第五章 牛粪高温堆肥过程中木质纤维素的降解以及纤维素降解菌的分离、鉴定 | 第122-150页 |
| 第一节 牛粪高温堆肥过程中木质纤维素的降解 | 第122-130页 |
| 1 前言 | 第122页 |
| 2 材料方法 | 第122-124页 |
| ·样品的采集与保存 | 第122页 |
| ·酶活测定 | 第122-124页 |
| ·木质纤维素含量的测定 | 第124页 |
| 3 结果与分析 | 第124-127页 |
| ·堆肥过程中酶活变化 | 第124-126页 |
| ·堆肥过程中木质纤维素含量的变化 | 第126-127页 |
| 4 讨论 | 第127-128页 |
| 5 小结 | 第128-130页 |
| 第二节 堆肥中纤维素降解菌的分离鉴定以及β-葡聚糖内切酶基因的克隆表达 | 第130-150页 |
| 1 引言 | 第130页 |
| 2 材料方法 | 第130-132页 |
| ·纤维素分解菌的分离样品 | 第130页 |
| ·培养基及配方 | 第130-131页 |
| ·试剂、菌株和载体 | 第131页 |
| ·纤维素降解菌的筛选 | 第131页 |
| ·酶活测定 | 第131-132页 |
| ·细菌鉴定 | 第132页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆和表达 | 第132-136页 |
| 3 结果与分析 | 第136-144页 |
| ·样品的富集及菌株的分离 | 第136页 |
| ·纤维素降解菌株T1和T2的产酶情况研究 | 第136-137页 |
| ·纤维素降解菌株T1和T2的鉴定 | 第137-140页 |
| ·Bacillus cereus T1和Bacillus subtilis T2菌株内切酶基因的克隆和表达 | 第140-144页 |
| 4 讨论 | 第144-145页 |
| 5 小结 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-150页 |
| 全文总结 | 第150-152页 |
| 创新点 | 第152-154页 |
| 附录1 试剂配方 | 第154-156页 |
| 附录2 研究中获得的相关DNA序列 | 第156-158页 |
| 攻读学位期间已经(待)发表论文 | 第158-160页 |
| 致谢 | 第160页 |
