| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩写词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 C_4光合途径在C_3植物中的研究 | 第13-18页 |
| ·光合作用与产量的关系 | 第13-14页 |
| ·不同光合作用途径的机制 | 第14-15页 |
| ·PEPCase的结构与作用机制 | 第15-17页 |
| ·PEPC的转基因研究 | 第17-18页 |
| 2 转基因水稻的外源蛋白检测方法 | 第18-19页 |
| ·Western检测技术 | 第18页 |
| ·酶联免疫吸附技术 | 第18-19页 |
| ·免疫试纸条法 | 第19页 |
| 3 单克隆抗体的研究进展 | 第19-24页 |
| ·单克隆抗体技术的发展 | 第20-23页 |
| ·杂交瘤技术的基本原理 | 第20-21页 |
| ·杂交瘤技术的基本流程 | 第21-23页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第23页 |
| ·单克隆抗体技术的应用 | 第23-24页 |
| ·微生物的检测 | 第23页 |
| ·微量成分的检测 | 第23页 |
| ·免疫学中的应用 | 第23-24页 |
| ·临床上的应用 | 第24页 |
| 4 研究背景与意义 | 第24-27页 |
| 第二章 PEPCase单克隆抗体的制备 | 第27-45页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·实验动物和细胞 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-35页 |
| ·动物免疫 | 第28页 |
| ·骨髓瘤细胞的培养 | 第28页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第28页 |
| ·脾细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·细胞融合 | 第29页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第29-31页 |
| ·检测方法——间接ELISA方法反应条件的确定 | 第29-31页 |
| ·最佳抗原包被浓度和抗体稀释度的确定 | 第29-30页 |
| ·封闭液的选择 | 第30页 |
| ·抗原抗体最佳作用时间的确定 | 第30页 |
| ·酶标二抗的最佳稀释度和作用时间的确定 | 第30页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第30-31页 |
| ·抗体阳性孔的检测及筛选 | 第31页 |
| ·抗体阳性孔杂交瘤细胞的亚克隆 | 第31页 |
| ·阳性单克隆细胞的扩大培养、冻存及复苏 | 第31页 |
| ·杂交瘤细胞株分泌抗体的稳定性 | 第31-32页 |
| ·腹水型单克隆抗体的制备 | 第32页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第32页 |
| ·单抗的纯化 | 第32-33页 |
| ·腹水的处理方法 | 第32页 |
| ·透析袋的处理 | 第32-33页 |
| ·单抗的纯化方法 | 第33页 |
| ·单克隆抗体蛋白浓度的测定 | 第33页 |
| ·纯化后抗体IgG效价的测定 | 第33页 |
| ·纯化单抗亲和力的测定 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE检测单抗的纯度 | 第34页 |
| ·Western-blot鉴定单克隆抗体的结合活性及反应性 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-43页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第35-40页 |
| ·最佳抗原包被浓度和血清稀释度 | 第35-36页 |
| ·封闭液的选择 | 第36-37页 |
| ·抗原抗体最佳作用时间 | 第37页 |
| ·酶标二抗的最佳稀释度和作用时间 | 第37-38页 |
| ·底物作用时间 | 第38-39页 |
| ·间接ELISA方法操作程序和结果判定 | 第39-40页 |
| ·融合细胞的选择 | 第40页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的选择 | 第40页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株克隆化 | 第40页 |
| ·杂交瘤细胞株分泌抗体的稳定性 | 第40页 |
| ·单克隆抗体亚型 | 第40页 |
| ·单克隆抗体蛋白浓度 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体的效价 | 第41页 |
| ·单克隆抗体亲和常数 | 第41-42页 |
| ·纯化后单抗的纯度 | 第42页 |
| ·纯化后单抗4E5的结合活性及反应性 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 5 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 检测转PEPC基因水稻双夹心ELISA方法的建立 | 第45-61页 |
| 1 实验材料 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45页 |
| ·试剂与材料 | 第45页 |
| ·实验动物 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-50页 |
| ·PEPCase多克隆抗体的制备 | 第45-47页 |
| ·动物免疫 | 第45-46页 |
| ·动物采血 | 第46页 |
| ·耳缘静脉采血 | 第46页 |
| ·心脏采血 | 第46页 |
| ·抗血清的收集及保存 | 第46页 |
| ·多克隆抗体IgG的纯化 | 第46-47页 |
| ·多克隆抗体蛋白浓度的测定 | 第47页 |
| ·多克隆抗体IgG效价的测定 | 第47页 |
| ·双夹心ELISA方法的建立 | 第47-49页 |
| ·双夹心ELISA方法最佳反应条件的确定 | 第47-48页 |
| ·多抗与单抗最佳反应浓度的确定 | 第47页 |
| ·封闭液的选择 | 第47-48页 |
| ·抗原最佳反应时间的确定 | 第48页 |
| ·单抗最佳反应时间的确定 | 第48页 |
| ·抗最佳反应浓度和时间的确定 | 第48页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第48页 |
| ·特异性实验 | 第48-49页 |
| ·敏感性实验 | 第49页 |
| ·保存期实验 | 第49页 |
| ·重复性实验 | 第49页 |
| ·双夹心ELISA方法检测转PEPC基因水稻 | 第49页 |
| ·与PCR检测方法的比较 | 第49-50页 |
| ·植物总DNA的提取方法 | 第49-50页 |
| ·转基因水稻植株的PCR扩增检测 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-58页 |
| ·多克隆抗体蛋白浓度 | 第50页 |
| ·多克隆抗体IgG的效价 | 第50-51页 |
| ·双夹心ELISA方法最佳反应条件 | 第51-55页 |
| ·多抗与单抗最佳反应浓度 | 第51页 |
| ·封闭液的选择 | 第51页 |
| ·抗原最佳反应时间 | 第51-53页 |
| ·单抗最佳反应时间 | 第53页 |
| ·二抗最佳反应浓度和时间 | 第53-55页 |
| ·双夹心ELISA方法操作程序和结果判定 | 第55页 |
| ·特异性实验 | 第55页 |
| ·敏感性实验 | 第55-56页 |
| ·保存期实验 | 第56-57页 |
| ·重复性实验 | 第57页 |
| ·双夹心ELISA方法检测转PEPC基因水稻 | 第57-58页 |
| ·与PCR检测方法的比较 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 5 本章小结 | 第59-61页 |
| 全文总结 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第79页 |