| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-26页 |
| ·急慢性中枢神经系统疾病造成的神经损伤 | 第10-14页 |
| ·缺血性中风造成的神经损伤 | 第10-12页 |
| ·阿尔茨海默症造成的神经损伤 | 第12-14页 |
| ·成体脑中存在神经元的增殖 | 第14-16页 |
| ·缺血性脑损伤中的神经元增殖 | 第14-15页 |
| ·辐射损伤中的神经元增殖 | 第15页 |
| ·癫痫中的神经元增殖 | 第15页 |
| ·神经退行性疾病中的神经元增殖 | 第15-16页 |
| ·研究及治疗急慢性中枢神经系统疾病的策略 | 第16-17页 |
| ·研究急慢性中枢神经系统疾病的新模型——宫内胎脑基因转染(IUE) | 第17-19页 |
| ·Cre重组酶介导的神经元条件死亡系统中的相关功能元件 | 第19-24页 |
| ·Cre/loxP系统的原理及应用 | 第19-20页 |
| ·在神经元中特异性启动的启动子——Thy-1.2 | 第20-22页 |
| ·白喉毒素受体介导的细胞凋亡 | 第22-23页 |
| ·在同一阅读框下表达多种蛋白的新策略——2A peptide | 第23-24页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料 | 第26-32页 |
| ·实验动物及细胞 | 第26页 |
| ·实验所用相关质粒 | 第26-28页 |
| ·p-EGFP-N1质粒 | 第26-27页 |
| ·p-EGFP-C1质粒 | 第27-28页 |
| ·p-TagRFP-N质粒 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-31页 |
| ·主要器材 | 第31-32页 |
| 第三章 方法 | 第32-45页 |
| ·Thy-1启动的Cre重组酶表达载体的构建 | 第33-38页 |
| ·C57BL/6、C57BL/6-Gt(ROSA)26Sortml(HBEGF)Awai/J小鼠基因组的提取 | 第33-34页 |
| ·Thy-1-Cre-SV40 polyA骨架质粒的扩增 | 第34-35页 |
| ·Thy-1-Cre-3’UTR骨架质粒的扩增 | 第35页 |
| ·Thy-1基因3’UTR的扩增 | 第35-36页 |
| ·Thy-1基因5’末端的扩增 | 第36页 |
| ·Thy-1-Cre-3’UTR骨架质粒与Thy-1基因3’末端的融合 | 第36-37页 |
| ·Cre-ERT2片段的扩增 | 第37页 |
| ·报告基因EGFP的扩增 | 第37-38页 |
| ·Thy-1-5’UTR与Cre的融合 | 第38页 |
| ·CMV-loxP-TagRFP-SV40 polyA-loxP-DTR-2AP-EGFP表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·loxP-TagRFP-SV40 polyA-loxP的构建 | 第39页 |
| ·p-DTR-EGFP-N1质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·p-DTR-2AP-EGFP-N1质粒的构建 | 第40页 |
| ·CMV-loxP-TagRFP-SV40 polyA-loxP-EGFP表达载体的构建 | 第40页 |
| ·CMV-loxP-TagRFP-SV40 polyA-loxP-DTR-2AP-EGFP表达载体的构建 | 第40页 |
| ·细胞培养 | 第40-42页 |
| ·神经元的原代培养 | 第40-42页 |
| ·HepG2、HeLa细胞的培养 | 第42页 |
| ·磷酸钙共沉淀法转染细胞 | 第42-43页 |
| ·宫内电转技术转染小鼠胎脑 | 第43页 |
| ·相关质粒转染效果的荧光检测 | 第43页 |
| ·p-DTR-EGFP-N1转染阳性细胞的免疫组化鉴定 | 第43-44页 |
| ·p-DTR-N1质粒的构建及效果的评估 | 第44页 |
| ·他莫西芬(tamoxifen)和白喉毒素(DT)的给药 | 第44页 |
| ·组织切片的制备及观察 | 第44-45页 |
| 第四章 结果 | 第45-63页 |
| ·Thy-1-Cre-SV40 polyA骨架质粒的扩增 | 第45-46页 |
| ·Thy-1基因5’末端的扩增 | 第46-47页 |
| ·Thy-1基因3’末端的扩增 | 第47-48页 |
| ·Cre-ERT2片段的扩增 | 第48-49页 |
| ·DTR片段的扩增及p-DTR-EGFP-N1质粒的构建 | 第49-50页 |
| ·loxP-TagRFP-SV40 polyA-loxP的扩增及CMV-loxP-TagRFP-SV40 polyA-loxP-EGFP表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·Thy-1-EGFP-3’UTR的构建 | 第51-52页 |
| ·Thy-1-5’UTR与Cre的融合 | 第52-53页 |
| ·磷酸钙共沉淀法p-EGFP-N1转染HepG2细胞 | 第53-54页 |
| ·p-DTR-EGFP-N1质粒转染HepG2阳性细胞的免疫组化鉴定 | 第54-56页 |
| ·Thy-1-EGFP-3'UTR、Thy-1-EGFP-SV40 polyA质粒转染培养条件下的皮层神经元及HeLa细胞 | 第56-57页 |
| ·转染p-DTR-N1后HeLa细胞对白喉毒素的敏感性增高 | 第57-59页 |
| ·Thy-1-EGFP-3’UTR与CMV-loxP-TagRFP-SV40 polyA-loxP-EGFP质粒转染培养条件下的海马神经元和HepG2细胞 | 第59-61页 |
| ·宫内电穿孔转基因技术转染小鼠胎脑组织 | 第61-63页 |
| 第五章 讨论 | 第63-69页 |
| ·表达载体系统构建过程的讨论 | 第63-67页 |
| ·磷酸钙转染法 | 第67页 |
| ·运用宫内电穿孔转基因技术转染小鼠胎脑组织的注意事项 | 第67-68页 |
| ·未来工作的展望 | 第68-69页 |
| 第六章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-81页 |
| 附录 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
