| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第1章 绪论(超高分辨率荧光成像的研究进展) | 第12-36页 |
| ·荧光显微成像技术 | 第12-18页 |
| ·荧光探针的发光基础 | 第13-16页 |
| ·荧光显微镜的基本组成 | 第16-18页 |
| ·荧光显微镜的分辨率 | 第18-19页 |
| ·超高分辨率成像技术的发展史 | 第19-23页 |
| ·远场超分辨显微成像的发展史 | 第20-21页 |
| ·通过条纹光实现超分辨成像的技术 | 第21-23页 |
| ·利用光开关荧光探针实现超分辨成像 | 第23-28页 |
| ·(F)PALM/STORM技术的原理 | 第24-25页 |
| ·轴向分辨率的提高——三维(F)PALM/STORM技术 | 第25-28页 |
| ·(F)PALM/STORM技术需要用到的荧光探针 | 第28-34页 |
| ·(F)PALM/STORM所用荧光探针的基本要求 | 第29页 |
| ·(F)PALM/STORM中使用的荧光蛋白 | 第29-33页 |
| ·(F)PALM/STORM中使用的荧光染料 | 第33-34页 |
| ·本论文的主要工作内容及意义 | 第34-36页 |
| 第2章 基本实验方法 | 第36-40页 |
| ·(F)PALM/STORM样品制备 | 第36-37页 |
| ·玻片清洗 | 第36页 |
| ·细胞转染和滴片 | 第36-37页 |
| ·细胞固定 | 第37页 |
| ·抗体染色 | 第37页 |
| ·(F)PALM/STORM平台建设 | 第37-40页 |
| ·器材选用 | 第37-38页 |
| ·双色(F)PALM/STORM | 第38-40页 |
| 第3章 新型光开关荧光蛋白mGeos的开发 | 第40-64页 |
| ·引言(拟解决的的科学问题) | 第40-42页 |
| ·实验材料和实验方法 | 第42-45页 |
| ·基于mEos2设计和突变一系列光开关蛋白 | 第42页 |
| ·实验用质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·荧光蛋白的纯化和光学性质的测量 | 第43页 |
| ·荧光蛋白的单分子特性 | 第43-44页 |
| ·荧光蛋白共聚焦成像和光关闭速率计算 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-61页 |
| ·将Dronpa的同系物mEos2改造成PSFP | 第45-48页 |
| ·mGeos的光关闭动力学 | 第48-50页 |
| ·与mEos2类似,mGeos是很好的蛋白质荧光标签 | 第50-53页 |
| ·mGeos-M是出色的用于(F)PALM/STORM成像的标签 | 第53-55页 |
| ·mGeos-M可以和PA-mCherry1组合用于双色(F)PALM/STORM成像 | 第55-58页 |
| ·mGeos-E单分子有相对更多的闪烁事件 | 第58-60页 |
| ·mGeos-ES与rsEGFP的比较 | 第60-61页 |
| ·讨论与分析 | 第61-64页 |
| 第4章 单体光转化荧光蛋白mEos3s的研发 | 第64-92页 |
| ·引言(拟解决的科学问题) | 第64-67页 |
| ·实验材料和技术方法 | 第67-70页 |
| ·蛋白质晶体学 | 第67页 |
| ·原始质粒构建 | 第67-68页 |
| ·研究蛋白单体性质的方法 | 第68-69页 |
| ·荧光蛋白光学性质的测量 | 第69-70页 |
| ·荧光蛋白单分子性质的测量 | 第70页 |
| ·实验结果 | 第70-88页 |
| ·基于结构解析设计突变位点 | 第70-75页 |
| ·mEos3.1和mEos3.2的单体性质鉴定 | 第75-77页 |
| ·mEos3.1和mEos3.2的光学性质 | 第77-81页 |
| ·mEos3.1和mEos3.2可以提高不可容蛋白的溶解性 | 第81-82页 |
| ·mEos3s可以作为示踪分子 | 第82-83页 |
| ·mEos3s和其它绿变红荧光蛋白光学的性质总结 | 第83-84页 |
| ·mEos3s的单分子特性 | 第84-86页 |
| ·mEos3s的奈奎斯特分辨率(Nyquist resolution) | 第86-87页 |
| ·mEos3s的光闪烁特性 | 第87-88页 |
| ·分析与讨论 | 第88-92页 |
| 第5章 新型基于神经网络的定位算法 | 第92-114页 |
| ·已有的定位算法优缺点 | 第92-94页 |
| ·基于高斯函数的传统定位方法 | 第92-93页 |
| ·基于真实点扩散函数的定位方法 | 第93-94页 |
| ·建立定位真实单分子的神经网络算法 | 第94-100页 |
| ·真实单分子点扩散函数的建立 | 第94-96页 |
| ·网络构架的建立 | 第96-100页 |
| ·模拟数据定位分析 | 第100-103页 |
| ·实验数据的比较分析 | 第103-110页 |
| ·荧光珠的定位分析 | 第103-104页 |
| ·量子棒的定位分析 | 第104-106页 |
| ·ANN算法可以提高荧光蛋白和荧光染料的定位精度 | 第106-108页 |
| ·ANN算法的优势可以被扩展到三维层面 | 第108-110页 |
| ·实验讨论 | 第110-114页 |
| 参考文献 | 第114-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 缩略语 | 第122-124页 |
| 附录1 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第124-125页 |
| 附录2 攻读博士期间获得的学术奖励 | 第125页 |
| 附录3 攻读博士期间参加的学术会议 | 第125页 |
