| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-47页 |
| 1. SARS冠状病毒研究的综述 | 第12-37页 |
| ·SARS的爆发 | 第12-14页 |
| ·SARS冠状病毒基因组的进化和分组 | 第14-17页 |
| ·SARS的流行病学研究 | 第17-24页 |
| ·SARS冠状病毒的潜伏期 | 第17页 |
| ·感染和SARS临床反应 | 第17-19页 |
| ·关于SARS的病理学研究 | 第19-20页 |
| ·冠状病毒的受体 | 第20-22页 |
| ·冠状病毒导致的其它疾病 | 第22-23页 |
| ·SARS的动物模型 | 第23-24页 |
| ·SARS冠状病毒的分子生物学 | 第24-37页 |
| ·病毒的结构及基因组 | 第24-25页 |
| ·冠状病毒的非结构蛋白 | 第25-31页 |
| ·病毒的复制 | 第31-34页 |
| ·病毒复制和转录的机理 | 第34-35页 |
| ·病毒对细胞系统的影响 | 第35-37页 |
| 2 RNA的加帽 | 第37-44页 |
| ·RNA的帽子结构 | 第37-38页 |
| ·病毒mRNA的加帽 | 第38-42页 |
| ·病毒RNA的常规加帽方式 | 第39-41页 |
| ·病毒RNA的非常规加帽途径 | 第41-42页 |
| ·甲基转移酶 | 第42-44页 |
| 3 翻译的起始 | 第44-47页 |
| ·mRNA帽子结合蛋白eIF4E | 第44-45页 |
| ·eIF4E与核酸的结合 | 第45-47页 |
| ·帽子结合的结构基础 | 第45页 |
| ·eIF4E与5’端不同序列的mRNAs的结合 | 第45-47页 |
| 第二章 材料与方法 | 第47-67页 |
| 1. 分子生物学相关技术 | 第47-55页 |
| ·构建克隆质粒 | 第47-50页 |
| ·PCR技术扩增DNA片段 | 第47页 |
| ·回收PCR片段(硅粉法) | 第47-48页 |
| ·限制性内切酶处理DNA片段和载体 | 第48页 |
| ·连接DNA片段和载体 | 第48页 |
| ·质粒转化 | 第48-49页 |
| ·鉴定阳性克隆 | 第49页 |
| ·质粒的抽提(参照天根质粒抽提试剂盒) | 第49-50页 |
| ·制备大肠杆菌感受态细胞 | 第50-52页 |
| ·氯化钙制备感受态细胞 | 第50-51页 |
| ·制备电转化感受态细胞 | 第51页 |
| ·制备超级感受态细胞 | 第51-52页 |
| ·保存菌种 | 第52页 |
| ·TRIZOL法提取细胞总RNA | 第52-53页 |
| ·RNA逆转录 | 第53页 |
| ·荧光定量PCR | 第53-55页 |
| 2. 细胞生物学相关实验 | 第55-59页 |
| ·配置DMEM细胞培养基 | 第55页 |
| ·细胞培养 | 第55页 |
| ·冻存与复苏细胞 | 第55-56页 |
| ·冻存细胞 | 第55-56页 |
| ·复苏细胞 | 第56页 |
| ·细胞转染 | 第56-58页 |
| ·脂质体转染细胞 | 第56-57页 |
| ·憐酸耗转染细胞 | 第57-58页 |
| ·检测分析荧光素酶活性 | 第58-59页 |
| 3. 蛋白质的表达,纯化与检测技术 | 第59-63页 |
| ·蛋白免疫印迹 | 第59-61页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第59-60页 |
| ·蛋白免疫印迹技术 | 第60-61页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第61-63页 |
| 4 生物化学相关实验 | 第63-67页 |
| ·N7甲基转移酶的活性检测 | 第63-65页 |
| ·液体闪烁计数仪检测 | 第63-64页 |
| ·SDS-PAGE放射性自显影 | 第64页 |
| ·薄层层析分析(Thin layer chromatogrphy,TLC) | 第64-65页 |
| ·鸟苷酸共价结合试验 | 第65页 |
| ·体外翻译试验 | 第65-67页 |
| 第三章 冠状病毒N7甲基转移酶nsp14对于核苷酸GTP的活性研究 | 第67-88页 |
| 摘要 | 第67页 |
| 1 前言 | 第67-69页 |
| 2 材料与方法 | 第69-73页 |
| ·质粒的构建 | 第69-71页 |
| ·细胞培养与DNA转染 | 第71页 |
| ·蛋白的表达和纯化 | 第71页 |
| ·甲基转移酶活性的生物化学分析 | 第71-72页 |
| ·鸟苷酸的共价结合实验 | 第72页 |
| ·体外翻译 | 第72-73页 |
| 3 实验结果 | 第73-86页 |
| ·SARS冠状病毒nsp14可以催化甲基基团向GTP转移 | 第73-76页 |
| ·脱氧GTP和双核苷酸帽子类似物也可以被SARS冠状病毒nsp14甲基化 | 第76-77页 |
| ·Nsp14对于GTP的N7甲基转移酶活性在冠状病毒中是普遍的 | 第77-79页 |
| ·SARS冠状病毒非结构蛋白不与鸟苷酸形成共价连接 | 第79-81页 |
| ·鉴定SARS冠状病毒nsp14 GTP甲基化活性的关键氨基酸位点 | 第81-82页 |
| ·SARS冠状病毒nsp14及甲基化产物m7GTP可以抑制蛋白翻译 | 第82-86页 |
| 4 讨论 | 第86-88页 |
| 研究总结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-108页 |
| 在读期间发表或待发表论文 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
