| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| ·抗菌肽的分类 | 第11-15页 |
| ·抗菌肽的来源 | 第11-13页 |
| ·抗菌肽所带净电荷数量 | 第13页 |
| ·抗菌肽的结构 | 第13-14页 |
| ·抗菌肽的理化性质 | 第14-15页 |
| ·抗菌肽的生物学作用 | 第15-19页 |
| ·抗菌肽的抗菌作用 | 第15-17页 |
| ·抗菌肽的抗肿瘤作用 | 第17-18页 |
| ·抗菌肽的抗真菌作用 | 第18页 |
| ·抗菌肽的抗病毒作用 | 第18页 |
| ·抗菌肽的抗寄生虫作用 | 第18页 |
| ·抗菌肽的抗氧化作用 | 第18-19页 |
| ·抗菌肽的应用 | 第19-22页 |
| ·在医药行业的应用 | 第19-21页 |
| ·在畜牧养殖行业的应用 | 第21页 |
| ·在食品和化妆品行业的应用 | 第21页 |
| ·在转基因动植物农业中的应用 | 第21-22页 |
| ·抗菌肽应用中存在的问题 | 第22-23页 |
| ·抗菌肽的生产成本问题 | 第22-23页 |
| ·抗菌肽的使用安全性问题 | 第23页 |
| ·抗菌肽引起的耐药性问题 | 第23页 |
| ·抗菌肽在体内的稳定性问题 | 第23页 |
| ·抗菌肽的制备 | 第23-26页 |
| ·融合表达法 | 第24-26页 |
| ·串联表达法 | 第26页 |
| ·蛙科动物抗菌肽研究进展 | 第26-28页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料和方法 | 第30-44页 |
| ·实验中用到的试剂 | 第30页 |
| ·实验中用到的仪器 | 第30页 |
| ·寡核苷酸的溶解 | 第30页 |
| ·两步法合成 BREVININ-2CE 基因 | 第30-35页 |
| ·DA-PCR 反应体系 1 组成 | 第33页 |
| ·DA-PCR 反应体系 2 组成 | 第33页 |
| ·DA-PCR 反应体系 3 组成 | 第33页 |
| ·DA-PCR 反应程序 | 第33-34页 |
| ·DA-PCR 产物胶回收 | 第34页 |
| ·OE-PCR 反应体系组成 | 第34页 |
| ·OE-PCR 拼接反应程序 | 第34-35页 |
| ·OE-PCR 产物检测与回收 | 第35页 |
| ·一步法合成 BREVININ-2CE 基因 | 第35-36页 |
| ·一步法反应体系组成 | 第35-36页 |
| ·一步法反应程序 | 第36页 |
| ·一步法合成 brevinin-2CE 基因产物检测与切胶回收 | 第36页 |
| ·T7 核酸内切酶 I 处理 | 第36-37页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 DNA | 第37页 |
| ·双酶切反应 | 第37页 |
| ·质粒双酶切反应体系 | 第37页 |
| ·目的基因双酶切反应体系 | 第37页 |
| ·酶切反应条件 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37-38页 |
| ·连接体系组成 | 第37-38页 |
| ·连接反应程序 | 第38页 |
| ·重组载体的热激转化 | 第38-39页 |
| ·CaCl2法制备感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·热激转化 | 第39页 |
| ·转化子筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| ·转化子筛选 | 第39页 |
| ·重组载体鉴定 | 第39-40页 |
| ·宿主毒性初步测定 | 第40页 |
| ·质粒遗传稳定性考察 | 第40-41页 |
| ·林蛙抗菌肽 BREVININ-2CE 的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·brevinin-2CE 的诱导表达 | 第41页 |
| ·brevinin-2CE 的 SDS-PAGE 检测 | 第41-42页 |
| ·包涵体的纯化 | 第42页 |
| ·CNBR 切割 KSI-2CE 融合蛋白 | 第42页 |
| ·抑菌活性检测 | 第42-43页 |
| ·抑制癌细胞增殖活性 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第44-63页 |
| ·林蛙抗菌肽 BREVININ-2CE 的氨基酸序列 | 第44页 |
| ·逆编码所用 E.COLI 密码子频率表 | 第44页 |
| ·E.COLI 偏爱密码子编码的 BREVININ-2CE 基因 | 第44-46页 |
| ·拟合成序列全长 | 第46页 |
| ·单链寡核苷酸的拆分 | 第46-47页 |
| ·两步法合成方案 | 第47-48页 |
| ·DA-PCR 拼接结果 | 第48页 |
| ·OE-PCR 拼接结果 | 第48-49页 |
| ·一步法合成方案 | 第49-50页 |
| ·一步法合成结果 | 第50页 |
| ·PET31B 质粒制备 | 第50-51页 |
| ·载体与基因的双酶切 | 第51-52页 |
| ·重组载体 PET31B2CE 的验证 | 第52-53页 |
| ·宿主毒性初步测定 | 第53页 |
| ·测序验证 | 第53-54页 |
| ·质粒丢失率检测 | 第54-60页 |
| ·未诱导工程菌质粒丢失率 | 第54-56页 |
| ·诱导工程菌质粒丢失率 | 第56页 |
| ·未诱导非毒性蛋白基因工程菌质粒丢失率 | 第56-58页 |
| ·诱导非毒性蛋白基因工程菌质粒丢失率 | 第58-60页 |
| ·BREVININ-2CE 的诱导表达 | 第60-61页 |
| ·CNBR 切割 KSI-2CE 融合蛋白 | 第61页 |
| ·琼脂扩散法检测抑菌活性 | 第61-62页 |
| ·抑制癌细胞增殖活性 | 第62-63页 |
| 第四章 结论 | 第63-66页 |
| ·实验结论 | 第63-65页 |
| ·进一步研究的方向 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
