| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 术语缩写表 | 第15-16页 |
| 1 前言 | 第16-19页 |
| 2 文献综述 | 第19-44页 |
| ·乙酰辅酶A代谢途径 | 第20-29页 |
| ·ACCase的结构 | 第20-22页 |
| ·ACCase的功能 | 第22-23页 |
| ·ACCase的表达与调控 | 第23-25页 |
| ·ACCase基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·ACCase的基因工程 | 第26-29页 |
| ·抗除草剂基因工程 | 第26-27页 |
| ·提高植物种子含油量基因工程 | 第27-28页 |
| ·提高藻类油脂含量基因工程 | 第28-29页 |
| ·磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶研究概况 | 第29-41页 |
| ·编码磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的基因克隆及高等植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的蛋白结构 | 第30-34页 |
| ·C_4植物中PEPC负责无机碳的初始同化 | 第34-35页 |
| ·C_3植物中PEPC的回补作用 | 第35-36页 |
| ·非光合型植物PEPC的多样性功能 | 第36-41页 |
| ·PEPC与光合作用的基因工程运用 | 第37-39页 |
| ·PEPC与环境胁迫 | 第39-40页 |
| ·PEPC与蛋白质/脂类代谢 | 第40-41页 |
| ·人工小RNA技术(artifical miRNA,amiRNA) | 第41-43页 |
| ·研究目的与意义 | 第43-44页 |
| 3 材料与方法 | 第44-57页 |
| ·油菜和拟南芥材料 | 第44页 |
| ·菌株、质粒、载体和感受态细胞 | 第44页 |
| ·拟南芥生长条件 | 第44-45页 |
| ·表达载体构建和植物转化 | 第45-50页 |
| ·大肠杆菌乙酰辅酶A羧化酶accD亚基表达载体pFGC-accD的构建 | 第45-46页 |
| ·植物复合表达载体pCambia-ABCD的构建 | 第46-47页 |
| ·人工小RNA的植物表达载体构建 | 第47-48页 |
| ·遗传转化 | 第48-50页 |
| ·拟南芥转化 | 第48-49页 |
| ·油菜转化(根癌农杆菌介导法) | 第49-50页 |
| ·DNA提取、PCR扩增及Southern杂交 | 第50-54页 |
| ·DNA提取 | 第50-51页 |
| ·PCR扩增 | 第51-53页 |
| ·大肠杆菌异质型ACCase各亚基基因的扩增 | 第51页 |
| ·油菜种子特异表达启动子Napin的克隆和终止子NOS的克隆 | 第51-52页 |
| ·油菜Rbcs转运肽基因的克隆 | 第52页 |
| ·甘蓝型油菜及近缘种中异质型ACCase亚基accD编码基因的克隆 | 第52页 |
| ·转基因植株PCR验证 | 第52-53页 |
| ·转基因Southern检测 | 第53-54页 |
| ·RNA的提取、RT-PCR和Stem-loop RT-PCR | 第54-55页 |
| ·转基因含油量和脂肪酸组分的测定 | 第55-56页 |
| ·蛋白抽提和PEPC酶活测定 | 第56页 |
| ·GUS染色及观察 | 第56-57页 |
| 4 结果与分析 | 第57-86页 |
| ·油菜近缘种accD基因的序列比较分析 | 第57-66页 |
| ·油菜近缘种中accD基因cDNA的扩增 | 第57页 |
| ·各近缘种accD基因碱基序列同源性分析 | 第57-62页 |
| ·各近缘种accD基因编码蛋白质结构分析 | 第62-63页 |
| ·各近缘种accD基因拷贝数的Southern检测 | 第63-66页 |
| ·pFGC-NTD的植物表达载体构建及遗传转化 | 第66-72页 |
| ·启动子、拟南芥Rbcs转运肽、大肠杆菌accD的克隆 | 第66页 |
| ·植物表达载体pFGC-accD的构建 | 第66-67页 |
| ·根癌农杆菌介导的油菜转化及抗除草剂再生苗的获得 | 第67-69页 |
| ·转基因油菜PCR检测和RT-PCR检测 | 第69-70页 |
| ·转基因油菜与对照的含油量和蛋白质含量比较 | 第70-72页 |
| ·转基因株系和对照植株千粒重比较 | 第72页 |
| ·大肠杆菌异质型ACCase基因转化油菜的研究 | 第72-77页 |
| ·启动子、拟南芥Rbcs转运肽、大肠杆菌各基因片段以及终止子片段的克隆 | 第72-73页 |
| ·植物复合表达质粒pCambia-ABCD的构建 | 第73-74页 |
| ·转pCambia-ABCD基因油菜抗潮霉素再生苗的PCR和Southernblot检测 | 第74-76页 |
| ·转基因油菜的RT-PCR检测 | 第76页 |
| ·GUS基因表达检测 | 第76-77页 |
| ·转pCambia-ABCD基因对油菜含油量的影响 | 第77页 |
| ·拟南芥目标基因Atppc4的amiRNA载体构建及转化研究 | 第77-86页 |
| ·拟南芥目标基因Atppc4的amiRNA载体构建 | 第77-80页 |
| ·拟南芥Atppc4-amiRNA的表达和检测 | 第80页 |
| ·Atppc4在转基因株系的表达 | 第80-81页 |
| ·拟南芥Atppc4-amiRNA的转录与拟南芥脂肪酸含量的关系 | 第81-82页 |
| ·GUS基因表达检测 | 第82-84页 |
| ·Atppc4的下调表达提高拟南芥的耐盐能力 | 第84-86页 |
| 5. 讨论 | 第86-91页 |
| ·甘蓝型油菜近缘种ACCase基因accD的序列分析 | 第86-87页 |
| ·异质型大肠杆菌eaccD基因和大肠杆菌ACCase复合基因植物表达载体的构建及油菜转化 | 第87-89页 |
| ·植物表达载体的构建及根癌农杆菌转化效果 | 第87-88页 |
| ·accD的表达及对油菜种子中脂肪酸和蛋白质含量的影响 | 第88-89页 |
| ·ACCase的四个亚基基因同时转入油菜籽粒的质体中对脂肪酸和蛋白质含量的影响 | 第89页 |
| ·构建人工小RNA载体敲除拟南芥细菌型Atppc4的研究 | 第89-91页 |
| 6 展望 | 第91-93页 |
| ·异质型ACCas基因accD和复合亚基基因的遗传转化研究 | 第91-92页 |
| ·Atppc4-amiRNA的研究 | 第92-93页 |
| 7 参考文献 | 第93-111页 |
| 附录Ⅰ 就读期间完成的论文目录 | 第111-112页 |
| 附录Ⅱ 作者简介 | 第112页 |
