耐高温碱性蛋白酶产生菌GXD9902的筛选及其aprN基因的克隆
| <中文摘要> | 第1页 |
| <中文关键词> | 第4-5页 |
| <英文摘要> | 第5页 |
| <英文关键词> | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第6-17页 |
| ·蛋白酶概况 | 第6-7页 |
| ·碱性蛋白酶背景 | 第7页 |
| ·碱性蛋白酶的来源 | 第7-8页 |
| ·碱性蛋白酶的作用机制 | 第8页 |
| ·碱性蛋白酶的性质 | 第8-9页 |
| ·碱性蛋白酶的应用 | 第9-11页 |
| ·碱性蛋白酶的基因工程及蛋白质工程研究 | 第11-15页 |
| ·本工作的目的 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-30页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·培养基及培养条件 | 第18页 |
| ·常用溶液、缓冲液 | 第18-20页 |
| ·仪器 | 第20-21页 |
| ·DNA的提取 | 第21-24页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25-26页 |
| ·电洗脱法回收DNA片段 | 第26-27页 |
| ·DNA的连接 | 第27-28页 |
| ·ABI DNA自动测序系统测定DNA序列 | 第28-29页 |
| ·蛋自酶活力的测定 | 第29-30页 |
| 第三章 产蛋白酶菌株的筛选 | 第30-36页 |
| ·土壤样品的采集 | 第30-31页 |
| ·菌株的分离 | 第31页 |
| ·产蛋白酶菌株的初步筛选 | 第31-32页 |
| ·产蛋白酶菌株的复筛 | 第32-33页 |
| ·GXD9902菌株的最佳产酶时间 | 第33页 |
| ·不同反应pH值对蛋白酶活力的影响 | 第33-34页 |
| ·蛋白酶的最适反应温度 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 GXD9902菌株的鉴定 | 第36-45页 |
| ·GXD9902菌种初步鉴定 | 第36页 |
| ·GXD9902菌株的16SrDNA序列分析 | 第36-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 碱性蛋白酶基因的克隆与序列分析 | 第45-58页 |
| ·PCR引物设计 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增及产物回收 | 第47-48页 |
| ·PCR产物的连接与转化 | 第48-50页 |
| ·碱性蛋白酶基因同源片段的序列测定 | 第50-52页 |
| ·序列同源性比较 | 第52-54页 |
| ·aprN基因在大肠杆菌菌株DH5α中的表达 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第六章 总结 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| <参考文献> | 第61-67页 |
