| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 综述 | 第10-21页 |
| ·毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第10-13页 |
| ·毕赤酵母表达系统背景 | 第10页 |
| ·毕赤酵母代谢及特点 | 第10-13页 |
| ·毕赤酵母补料分批表达外源蛋白 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母细胞表达外源蛋白优化策略 | 第14-16页 |
| ·培养水平策略 | 第14-15页 |
| ·细胞水平策略 | 第15-16页 |
| ·外源基因拷贝数量对毕赤酵母影响的研究 | 第16页 |
| ·微生物反应动力学模型 | 第16-17页 |
| ·胰岛素简介及其生产 | 第17-20页 |
| ·胰岛素 | 第17-19页 |
| ·胰岛素的生产 | 第19-20页 |
| ·课题意义与研究内容 | 第20-21页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌种 | 第21页 |
| ·培养基及溶液 | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·常用仪器 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23页 |
| ·培养方法 | 第23-24页 |
| ·种子培养 | 第23页 |
| ·菌种保藏 | 第23页 |
| ·摇瓶诱导培养 | 第23页 |
| ·5L发酵罐发酵 | 第23-24页 |
| ·分析和测定方法 | 第24-31页 |
| ·酵母总DNA制备 | 第24-25页 |
| ·Real-time PCR反应 | 第25页 |
| ·PIP基因和GAP基因标准曲线的建立 | 第25-27页 |
| ·发酵液中菌浓的测定方法 | 第27页 |
| ·甲醇浓度测定 | 第27-28页 |
| ·目的蛋白PIP浓度的测定 | 第28-29页 |
| ·在线参数检测 | 第29-30页 |
| ·细胞活性分析 | 第30-31页 |
| 第3章 多拷贝数毕赤酵母重组菌表达PIP发酵特性 | 第31-42页 |
| ·不同拷贝数毕赤酵母重组菌发酵过程参数分析 | 第31-37页 |
| ·多拷贝数毕赤酵母重组菌生长变化比较 | 第31-33页 |
| ·多拷贝重组毕赤酵母表达PIP结果 | 第33-35页 |
| ·多拷贝重组毕赤酵母单位体积氧代谢速率(OUR)与单位体积C02释放速率(CER)比较 | 第35-37页 |
| ·多拷贝重组毕赤酵母细胞存活率比较 | 第37-38页 |
| ·多拷贝数毕赤酵母重组菌外源基因稳定性 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 第4章 不同拷贝数毕赤酵母补料分批发酵的动力学模型建立 | 第42-53页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·动力学模型的建立 | 第42-45页 |
| ·细胞生长动力学模型的建立 | 第42-43页 |
| ·产物生成动力学模型的建立 | 第43-44页 |
| ·底物消耗动力学模型的建立 | 第44-45页 |
| ·模型参数求解 | 第45-46页 |
| ·模型的验证及分析 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-53页 |
| 第5章 山梨醇混合补料对不同拷贝数毕赤酵母表达PIP的影响 | 第53-61页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-59页 |
| ·山梨醇补加多拷贝数菌株生长变化 | 第53-54页 |
| ·山梨醇补加多拷贝数菌株PIP表达变化 | 第54-57页 |
| ·山梨醇补加多拷贝数菌SOUR变化 | 第57页 |
| ·山梨醇补加多拷贝数菌株细胞活性变化 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第6章 总结与展望 | 第61-63页 |
| ·总结 | 第61-62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
