| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-29页 |
| ·木瓜蛋白酶简介 | 第11-12页 |
| ·木瓜蛋白酶的来源 | 第11-12页 |
| ·木瓜蛋白酶性质及应用 | 第12页 |
| ·木瓜蛋白酶的分离纯化方法 | 第12-14页 |
| ·双水相分离纯化技术 | 第14-19页 |
| ·双水相体系(Aqueous two-phase system,ATPS) | 第14页 |
| ·双水相体系的形成 | 第14-15页 |
| ·双水相萃取原理 | 第15-17页 |
| ·相图 | 第16-17页 |
| ·组分在双水相体系中的分配系数 | 第17页 |
| ·双水相体系分离纯化操作的一般流程 | 第17页 |
| ·双水相体系分离纯化的特点 | 第17-18页 |
| ·双水相在分离纯化蛋白质中的应用 | 第18-19页 |
| ·酶的固定化 | 第19-25页 |
| ·固定化酶的产生和发展 | 第19-20页 |
| ·酶的固定化方法 | 第20-21页 |
| ·吸附法固定化酶 | 第20页 |
| ·包埋法固定化酶 | 第20页 |
| ·共价结合法固定化酶 | 第20-21页 |
| ·交联法固定化酶 | 第21页 |
| ·载体结合固定化和无载体固定化 | 第21-24页 |
| ·载体结合固定化 | 第21-23页 |
| ·无载体固定化 | 第23-24页 |
| ·木瓜蛋白酶的固定化及其应用 | 第24-25页 |
| ·统计学优化设计方法简介 | 第25-27页 |
| ·Plackett-Burman实验设计法 | 第25-26页 |
| ·响应面法 | 第26-27页 |
| ·本论文的研究内容和意义 | 第27-29页 |
| 第2章 木瓜蛋白酶的双水相纯化 | 第29-47页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验仪器与材料 | 第29-30页 |
| ·实验主要试剂材料 | 第29-30页 |
| ·实验主要仪器与设备 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-34页 |
| ·粗酶溶液配制 | 第30页 |
| ·双水相体系配制 | 第30-31页 |
| ·优化双水相体系的实验设计方案 | 第31-34页 |
| ·Plackett-Burman实验设计——筛选显著因素 | 第31-32页 |
| ·中心复合实验设计(CCD)——优化筛选得到的因素 | 第32-34页 |
| ·上相中木瓜蛋白酶与成相聚合物PEG的分离 | 第34页 |
| ·分析方法 | 第34-37页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| ·木瓜蛋白酶的酶活测定方法 | 第35-36页 |
| ·木瓜蛋白酶纯度的测定方法 | 第36页 |
| ·碱性蛋白非变性电泳(Basic protein native-PAGE) | 第36-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-45页 |
| ·木瓜蛋白酶的纯度测定 | 第37-38页 |
| ·Plackett-Burman实验设计结果与分析 | 第38-40页 |
| ·CCD实验优化结果及响应面分析 | 第40-42页 |
| ·双水相分离纯化木瓜蛋白酶最优条件的预测和验证 | 第42-44页 |
| ·高纯度木瓜蛋白酶冻干粉的制备 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 第3章 木瓜蛋白酶的原位固定化 | 第47-57页 |
| ·引言 | 第47-48页 |
| ·实验仪器与材料 | 第48-49页 |
| ·实验主要试剂材料 | 第48页 |
| ·实验主要仪器与设备 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-50页 |
| ·氨基载体的活化 | 第49页 |
| ·壳聚糖小球的制备与活化 | 第49页 |
| ·氨基载体和壳聚糖小球原位固定化木瓜蛋白酶 | 第49页 |
| ·环氧载体原位固定化木瓜蛋白酶 | 第49-50页 |
| ·在PEG相中制备木瓜蛋白酶交联酶聚集体 | 第50页 |
| ·分析方法 | 第50-51页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第50页 |
| ·固定化木瓜蛋白酶的酶活测定方法 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-56页 |
| ·氨基载体在PEG相中原位固定化木瓜蛋白酶 | 第51-52页 |
| ·壳聚糖小球在PEG相中原位固定化木瓜蛋白酶 | 第52-53页 |
| ·环氧载体在PEG相中原位固定化木瓜蛋白酶 | 第53页 |
| ·在PEG相中制备交联酶聚集体 | 第53-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第4章 固定化木瓜蛋白酶的性质研究和应用 | 第57-70页 |
| ·引言 | 第57-58页 |
| ·实验仪器与材料 | 第58页 |
| ·实验主要试剂材料 | 第58页 |
| ·实验主要仪器与设备 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·固定化酶的最适水解pH测定 | 第58页 |
| ·固定化酶的最适水解温度测定 | 第58页 |
| ·固定化酶的pH稳定性测定 | 第58-59页 |
| ·固定化酶的热稳定性测定 | 第59页 |
| ·固定化酶的储存稳定性 | 第59页 |
| ·单克隆抗体IgG的纯化方法 | 第59-60页 |
| ·固定化木瓜蛋白酶水解单克隆抗体IgG | 第60页 |
| ·抗体水解片段Fab和Fc的分离纯化方法 | 第60页 |
| ·分析方法 | 第60-62页 |
| ·酶活测定方法 | 第60页 |
| ·HPLC测定单克隆IgG浓度 | 第60-61页 |
| ·非变性蛋白电泳 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-68页 |
| ·LH-HA载体固定化酶的表观最适水解pH值 | 第62-63页 |
| ·LH-HA载体固定化酶的表观最适水解温度 | 第63页 |
| ·LH-HA载体固定化酶的pH稳定性 | 第63-64页 |
| ·LH-HA载体固定化酶的热稳定性 | 第64-65页 |
| ·LH-HA载体固定化酶的储存稳定性 | 第65-66页 |
| ·单克隆抗体IgG的纯化 | 第66页 |
| ·固定化木瓜蛋白酶水解单克隆抗体IgG | 第66-67页 |
| ·抗体水解片段Fab和Fc的分离纯化及验证 | 第67-68页 |
| ·本章小结 | 第68-70页 |
| 第5章 总结与展望 | 第70-72页 |
| ·全文总结 | 第70-71页 |
| ·展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
