缩略词表(Abbreviation) | 第1-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
前言 | 第13-17页 |
材料与方法 | 第17-37页 |
1. 材料 | 第17-19页 |
·实验动物 | 第17页 |
·菌株、细胞株及质粒 | 第17页 |
·分子生物学试剂及工具酶 | 第17-18页 |
·主要仪器 | 第18页 |
·细胞培养用品 | 第18页 |
·基本溶液配制 | 第18-19页 |
2. 猪APOBEC3F 基因的克隆 | 第19-23页 |
·猪APOBEC3F 基因克隆的引物设计与合成 | 第19页 |
·五指山猪外周血单个核细胞的分离 | 第19页 |
·PBMC 总RNA 的制备 | 第19-20页 |
·反转录合成cDNA | 第20页 |
·PCR 扩增 | 第20页 |
·pCDNA3-Flag-pA3F 载体的构建与鉴定 | 第20-22页 |
·pCDNA3-Flag-pA3F 载体的构建 | 第20-21页 |
·pCDNA3-Flag-pA3F 载体鉴定 | 第21-22页 |
·pA3F 基因在PK-15 细胞中的表达与鉴定 | 第22-23页 |
·质粒的准备 | 第22-23页 |
·细胞培养与转染 | 第23页 |
·pA3F 在PK-15 细胞中表达鉴定 | 第23页 |
3.pA3F 抑制PERV 病毒复制鉴定 | 第23-28页 |
·pA3F 过表达对PERV 复制抑制作用鉴定 | 第23-27页 |
·pA3F 在PK-15细胞中梯度表达鉴定 | 第23-25页 |
·pA3F过表达抑制PERV pol m RNA的水平 | 第25-26页 |
·pA3F 过表达抑制PERV 反转录酶水平 | 第26-27页 |
·RNAi 沉默pA3F 基因与PERV 增殖的改变 | 第27-28页 |
·pA3F 基因沉默与PERV 增殖改变 | 第27-28页 |
·PERV反转录酶检测 | 第28页 |
4.pA3F 蛋白实现在PERV 粒子中的包装鉴定 | 第28-30页 |
·转染质粒准备 | 第28-29页 |
·细胞培养与转染 | 第29页 |
·PERV病毒分离 | 第29页 |
·PERV 对pA3F 蛋白的包装鉴定 | 第29-30页 |
5.PERV gag 基因的克隆 | 第30-32页 |
·PERV gag 基因克隆的引物设计与合成 | 第30-31页 |
·PERV病毒的增殖与分离 | 第31页 |
·PERV病毒基因的提取 | 第31页 |
·反转录合成cDNA | 第31页 |
·PCR 扩增 | 第31页 |
·PCR 扩增产物的克隆与鉴定 | 第31页 |
·PERV gag基因在K-15细胞中的表达与鉴定 | 第31-32页 |
6.pA3F 蛋白与PERV gag 蛋白之间的相互作用鉴定 | 第32-34页 |
·转染质粒的准备 | 第32页 |
·细胞培养与转染 | 第32-33页 |
·免疫沉淀与免疫印迹 | 第33-34页 |
7.pA3F蛋白与PERV gag蛋白细胞内共定位观察 | 第34-37页 |
·荧光质粒的构建与鉴定 | 第34-35页 |
·引物设计与合成 | 第34页 |
·PCR 扩增目的基因 | 第34-35页 |
·荧光载体构建与鉴定 | 第35页 |
·转染质粒的准备 | 第35页 |
·细胞培养与转染 | 第35-36页 |
·标本制备 | 第36页 |
·激光共聚焦扫描显微镜观察共定位 | 第36-37页 |
结果 | 第37-55页 |
1 pA3F 基因扩增与鉴定 | 第37-39页 |
2 pA3F 基因表达产物鉴定 | 第39页 |
3 pA3F 抑制PERV 复制鉴定 | 第39-43页 |
·pA3F 在PK-15 细胞中的梯度表达鉴定 | 第39-40页 |
·pA3F 过表达细胞中PERV pol 基因m RNA 改变 | 第40-42页 |
·PERV反转录酶改变 | 第42-43页 |
·标准曲线制作 | 第42页 |
·反转录酶检测 | 第42-43页 |
4 pA3F 基因沉默与PERV 增殖的改变 | 第43-46页 |
·pA3F 基因沉默与PERV pol m RNA 水平改变 | 第43-45页 |
·PERV反转录酶检测 | 第45-46页 |
5 pA3F 实现在 PERV 颗粒中包装鉴定 | 第46-48页 |
6 PERV gag 基因扩增与鉴定 | 第48-50页 |
7 PERV gag 基因表达与鉴定 | 第50-51页 |
8 pA3F与PERV gag蛋白之间的相互作用鉴定 | 第51-52页 |
9 pA3F 与PERV gag 蛋白共定位观察 | 第52-55页 |
讨论 | 第55-61页 |
1 APOBEC 家族的抗病毒作用与对PERV 抑制 | 第55-56页 |
2 pA3F 抗病毒机制 | 第56-58页 |
3 反转录病毒对APOBEC分子的抑制作用逃逸 | 第58页 |
4 pA3F 抑制PERV 作用的意义 | 第58-61页 |
结论 | 第61-63页 |
参考文献 | 第63-71页 |
文献综述 | 第71-83页 |
参考文献 | 第79-83页 |
附录 | 第83-85页 |
个人简历 | 第85-87页 |
致谢 | 第87页 |