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建立SILAC定量技术并发现CD40受体激活后招募的复合物新组分

缩略词索引表第1-7页
摘要第7-10页
Abstract第10-13页
前言第13-18页
材料与方法第18-28页
 1. 材料及来源第18-19页
     ·试剂第18页
     ·主要仪器设备第18-19页
 2. 实验方法第19-28页
     ·SILAC 标记操作流程第19-20页
       ·等量混合后抗体纯化方法(Purification After Mixture,PAM)第19页
       ·抗体分别纯化后再混合的方法(Mixture After Purification,MAP)第19-20页
     ·SILAC 标记的细胞培养第20-22页
       ·培养基的配制第20-21页
       ·A20 细胞培养第21页
       ·A20 细胞的刺激第21页
       ·裂解细胞第21-22页
     ·蛋白质定量(Bradford 法)第22-23页
     ·免疫沉淀第23页
     ·聚丙烯酰胺凝胶分离第23页
     ·免疫印迹(Western Blot)第23-24页
     ·质谱样品的制备(胶内蛋白酶切、提取)[41]第24-25页
     ·高效液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定蛋白质第25-28页
结果第28-59页
 1. SILAC 技术的建立第28-33页
     ·细胞标记效率第28-31页
     ·质谱定量体系的评估第31-33页
 2. 细胞模型的建立第33-36页
     ·CD40 激活时间点的选择第33页
     ·CD40 配体激活效果的验证第33-34页
     ·免疫沉淀的体系的验证第34-36页
 3. 考染聚丙烯凝胶电泳分离蛋白(3 次实验)第36-37页
 4. 质谱鉴定和定量结果第37-46页
 5. 动态结合蛋白的功能注释第46-47页
 6. 相关变化蛋白质的量的变化及功能分析第47-58页
 7. CD40 与NEDD4 内源相互作用的验证第58-59页
讨论第59-61页
结论第61-62页
参考文献第62-68页
综述第68-77页
 考考文献第72-77页
个人简历第77-78页
致谢第78页

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