缩略词索引表 | 第1-7页 |
摘要 | 第7-10页 |
Abstract | 第10-13页 |
前言 | 第13-18页 |
材料与方法 | 第18-28页 |
1. 材料及来源 | 第18-19页 |
·试剂 | 第18页 |
·主要仪器设备 | 第18-19页 |
2. 实验方法 | 第19-28页 |
·SILAC 标记操作流程 | 第19-20页 |
·等量混合后抗体纯化方法(Purification After Mixture,PAM) | 第19页 |
·抗体分别纯化后再混合的方法(Mixture After Purification,MAP) | 第19-20页 |
·SILAC 标记的细胞培养 | 第20-22页 |
·培养基的配制 | 第20-21页 |
·A20 细胞培养 | 第21页 |
·A20 细胞的刺激 | 第21页 |
·裂解细胞 | 第21-22页 |
·蛋白质定量(Bradford 法) | 第22-23页 |
·免疫沉淀 | 第23页 |
·聚丙烯酰胺凝胶分离 | 第23页 |
·免疫印迹(Western Blot) | 第23-24页 |
·质谱样品的制备(胶内蛋白酶切、提取)[41] | 第24-25页 |
·高效液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定蛋白质 | 第25-28页 |
结果 | 第28-59页 |
1. SILAC 技术的建立 | 第28-33页 |
·细胞标记效率 | 第28-31页 |
·质谱定量体系的评估 | 第31-33页 |
2. 细胞模型的建立 | 第33-36页 |
·CD40 激活时间点的选择 | 第33页 |
·CD40 配体激活效果的验证 | 第33-34页 |
·免疫沉淀的体系的验证 | 第34-36页 |
3. 考染聚丙烯凝胶电泳分离蛋白(3 次实验) | 第36-37页 |
4. 质谱鉴定和定量结果 | 第37-46页 |
5. 动态结合蛋白的功能注释 | 第46-47页 |
6. 相关变化蛋白质的量的变化及功能分析 | 第47-58页 |
7. CD40 与NEDD4 内源相互作用的验证 | 第58-59页 |
讨论 | 第59-61页 |
结论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-68页 |
综述 | 第68-77页 |
考考文献 | 第72-77页 |
个人简历 | 第77-78页 |
致谢 | 第78页 |