| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-27页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·病害发生分布与危害 | 第13-14页 |
| ·病原菌生物学特性 | 第14-15页 |
| ·R.solanacearum 的分类地位 | 第14页 |
| ·R.solanacearum 的形态及存活条件 | 第14页 |
| ·R.solanacearum 的寄主范围 | 第14-15页 |
| ·R.solanacearum 的侵染途径 | 第15页 |
| ·R.SOLANACEARUM 检测研究现状 | 第15-20页 |
| ·常规检测法 | 第15页 |
| ·指示植物法 | 第15-16页 |
| ·血清学方法 | 第16-17页 |
| ·分子生物学方法 | 第17-20页 |
| ·荧光定量PCR 技术在土壤微生物检测中的应用 | 第20-24页 |
| ·提取和纯化土壤微生物总DNA 的研究进展 | 第21-23页 |
| ·荧光定量PCR 技术在土壤病原微生物检测中的应用 | 第23-24页 |
| ·研究目标与内容 | 第24-25页 |
| ·研究目标 | 第24页 |
| ·主要研究内容 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25页 |
| ·创新点 | 第25-27页 |
| 2 烟草青枯病菌常规PCR 检测体系的建立 | 第27-34页 |
| ·材料与仪器 | 第27-29页 |
| ·供试菌株 | 第27页 |
| ·主要培养基 | 第27页 |
| ·细菌基因组DNA 提取试剂 | 第27-28页 |
| ·其他主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-31页 |
| ·细菌基因组DNA 的制备（CTAB 法） | 第29-30页 |
| ·烟草青枯病菌常规PCR 检测体系的建立 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-34页 |
| ·引物的筛选 | 第31-32页 |
| ·常规PCR 检测体系的建立和优化 | 第32页 |
| ·常规PCR 检测体系性能测定 | 第32-34页 |
| 3 土壤中烟草青枯病菌常规PCR 检测体系的建立 | 第34-43页 |
| ·材料与仪器 | 第34页 |
| ·供试土壤样品 | 第34页 |
| ·土壤基因组DNA 提取试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·土壤样品的采集 | 第34页 |
| ·土壤基因组总DNA 的制备 | 第34-36页 |
| ·土壤中烟草青枯病菌常规PCR 体系的优化建立 | 第36页 |
| ·PCR 扩增产物克隆、转化和鉴定 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-43页 |
| ·土壤样品的采集 | 第37-39页 |
| ·土壤基因组总DNA 制备方法的比较 | 第39-41页 |
| ·土壤中烟草青枯病菌常规PCR 体系的优化建立 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物扩增条带正确性的验证 | 第42-43页 |
| 4 土壤中烟草青枯病菌荧光定量PCR 检测体系的建立 | 第43-57页 |
| ·材料与仪器 | 第43页 |
| ·供试菌株 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·烟草青枯病植株根际微生物的分离筛选 | 第43页 |
| ·SYBR GreenⅠ荧光染料RTi-PCR 检测体系的建立 | 第43-45页 |
| ·TaqMan 探针RTi-PCR 检测体系的建立 | 第45页 |
| ·两种RTi-PCR 检测体系的比较与评价 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-57页 |
| ·烟草青枯病植株根际微生物的分离筛选 | 第46页 |
| ·SYBR GreenⅠ荧光染料RTi-PCR 检测体系的建立 | 第46-50页 |
| ·TaqMan 探针RTi-PCR 检测体系的建立 | 第50-54页 |
| ·两种RTi-PCR 检测体系的比较与评价 | 第54-57页 |
| 5 烟草青枯病菌检测试剂盒的初步研制 | 第57-59页 |
| ·材料与仪器 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·实验仪器 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-58页 |
| ·标准阳性对照品的制备 | 第57页 |
| ·烟草青枯病菌常规PCR 检测试剂盒的制备和性能测试 | 第57页 |
| ·烟草青枯病菌RTi-PCR 检测试剂盒的制备和性能测试 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-59页 |
| ·烟草青枯病菌常规PCR 检测试剂盒的制备和性能测试 | 第58页 |
| ·烟草青枯病菌RTi-PCR 检测试剂盒的制备和性能测试 | 第58-59页 |
| 6 讨论 | 第59-62页 |
| ·引物和探针的设计及其检测特异性 | 第59页 |
| ·RTI-PCR 中扩增片段长度对检测效果的影响 | 第59页 |
| ·不同土壤基因组DNA 提取方法对检测结果的影响 | 第59-60页 |
| ·常规PCR 和RTI-PCR 检测性能对检测结果的影响 | 第60页 |
| ·两种RTI-PCR 检测体系的比较与评价 | 第60-61页 |
| ·PCR 检测假阳性与假阴性的排除与降低 | 第61页 |
| ·烟草青枯病菌分子检测试剂盒的评价 | 第61-62页 |
| 7 主要结论与后续工作展望 | 第62-64页 |
| ·主要结论 | 第62页 |
| ·后续工作展望 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录 | 第72-76页 |
| A 烟草青枯病田间危害图 | 第72页 |
| B PCR 扩增片段测序结果及比对图 | 第72-74页 |
| C 攻读硕士学位期间参与的科研项目 | 第74页 |
| D 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第74页 |
| E 攻读硕士学位期间撰写的专利 | 第74-76页 |
