| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 前言 | 第15-29页 |
| 一、Fas/FasL系统及其诱导的凋亡在肝癌发生的重要地位 | 第15-20页 |
| 1 Fas/FasL系统及其诱导的凋亡 | 第15-16页 |
| 2 Fas表达水平与肝癌发生 | 第16-17页 |
| 3 FasL表达水平与肝癌发生 | 第17-18页 |
| 4 FasL蛋白的应用研究 | 第18-20页 |
| 二、RGD肽作为肿瘤靶向载体的肿瘤靶向治疗 | 第20-28页 |
| 1 RGD肽及整合素家族概述 | 第22-23页 |
| 2 RGD肽抑制肿瘤细胞粘附与迁移 | 第23-24页 |
| 3 RGD肽对肿瘤细胞凋亡的影响 | 第24-25页 |
| 4 RGD腺病毒载体在基因治疗肿瘤中的靶向作用 | 第25-27页 |
| 5 RGD肽作为载体在肿瘤治疗中的应用 | 第27-28页 |
| 三、研究目的与内容 | 第28-29页 |
| 第一章 融合蛋白RGD-FasL的表达及其活性鉴定 | 第29-49页 |
| 一、材料和方法 | 第29-40页 |
| 1 材料 | 第29-32页 |
| ·菌株及质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第29-30页 |
| ·主要仪器及设备 | 第30-31页 |
| ·主要溶液的配制 | 第31-32页 |
| 2.方法 | 第32-40页 |
| ·引物的合成 | 第32-33页 |
| ·基因的构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的构建及其转化 | 第34-36页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第37-38页 |
| ·目的蛋白的纯化和复性 | 第38-40页 |
| 二、结果与分析 | 第40-46页 |
| 1 RGD-FasL的基因构建 | 第40-41页 |
| 2 重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| 3 目的蛋白的表达与纯化 | 第41-46页 |
| ·RGD-FasL在大肠杆菌中的表达 | 第41-45页 |
| ·RGD-FasL蛋白浓度的测定 | 第45-46页 |
| 三、讨论 | 第46-49页 |
| 第二章 RGD-FasL功能分析 | 第49-71页 |
| 一、材料和方法 | 第49-59页 |
| 1 材料 | 第49-52页 |
| ·细胞株和实验小鼠 | 第49页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第49-50页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第50-51页 |
| ·主要仪器与设备 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-59页 |
| ·细胞培养 | 第52-53页 |
| ·流式细胞术(FCM)检测肝癌细胞表面Fas、CD61的表达 | 第53页 |
| ·RGD-FasL的体外黏附实验 | 第53-54页 |
| ·MTT比色法检测RGD-FasL体外活性 | 第54页 |
| ·Annexin V/PI方法对RGD-FasL诱导细胞凋亡率的检测 | 第54-55页 |
| ·RGD-FasL融和蛋白的体内抑瘤实验 | 第55-57页 |
| ·HE染色实验 | 第57页 |
| ·免疫组化方法分析肿瘤组织CD61的表达 | 第57-58页 |
| ·TUNEL法检测细胞凋亡 | 第58页 |
| ·统计学处理 | 第58-59页 |
| 二、结果与分析 | 第59-68页 |
| 1 流式细胞术(FCM)检测肝癌细胞表面Fas、CD61的表达 | 第59页 |
| 2 RGD-FasL与Hela细胞的体外黏附实验 | 第59-60页 |
| 3 RGD-FasL对肝癌细胞H22和H9101生长增殖的影响 | 第60-61页 |
| 4 Annexin V/PI方法对细胞凋亡率的检测 | 第61-62页 |
| 5 RGD-FasL体内抑瘤实验 | 第62-64页 |
| 6 HE染色检测细胞凋亡 | 第64-66页 |
| 7 免疫组化方法检测肿瘤组织中CD61表达 | 第66-67页 |
| 8 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第67-68页 |
| 三、讨论 | 第68-71页 |
| 全文总结 | 第71-72页 |
| 【参考文献】 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
