| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第15-17页 |
| 第一章 伪狂犬病病毒鄂A株gE~-/gI~-基因缺失突变株的构建以及免疫效果的研究 | 第17-50页 |
| 1 文献综述 | 第17-28页 |
| ·伪狂犬病病毒的分子生物学 | 第18-23页 |
| ·伪狂犬病病毒的结构 | 第18页 |
| ·伪狂犬病病毒的基因组 | 第18-19页 |
| ·伪狂犬病病毒的基因和蛋白质 | 第19-23页 |
| ·gE和gI糖蛋白 | 第20-22页 |
| ·其他主要糖蛋白 | 第22-23页 |
| ·致病机理 | 第23-24页 |
| ·神经嗜性 | 第23页 |
| ·潜伏感染 | 第23-24页 |
| ·伪狂犬病疫苗研究进展 | 第24-28页 |
| ·伪狂犬病病毒作为活病毒载体的应用 | 第24-25页 |
| ·伪狂犬病病毒疫苗研究进展 | 第25-28页 |
| ·自然弱毒疫苗 | 第25页 |
| ·亚单位疫苗 | 第25-26页 |
| ·核酸疫苗 | 第26页 |
| ·重组疫苗 | 第26-27页 |
| ·以腺病毒为载体的重组PRV疫苗 | 第26页 |
| ·以痘苗病毒为载体的重组PRV疫苗 | 第26页 |
| ·以伪狂犬病毒为载体的重组PRV疫苗 | 第26-27页 |
| ·基因缺失疫苗 | 第27页 |
| ·gE基因缺失疫苗在PRV根除计划中的作用 | 第27-28页 |
| 2 研究目的与意义 | 第28页 |
| 3 材料与方法 | 第28-36页 |
| ·材料 | 第28-31页 |
| ·细胞、病毒、细菌、质粒和试剂 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·缓冲液 | 第30-31页 |
| ·制备质粒用缓冲液 | 第30页 |
| ·Southern杂交试剂 | 第30页 |
| ·Western blot相关溶液 | 第30页 |
| ·其它溶液 | 第30-31页 |
| ·试验动物 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-36页 |
| ·质粒DNA的制备、纯化 | 第31-32页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第31页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第32页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·Southern印迹 | 第32-33页 |
| ·蛋白质斑点印迹 | 第33页 |
| ·间接免疫荧光 | 第33页 |
| ·病毒基因组DNA的制备 | 第33页 |
| ·体外转染哺乳动物细胞脂质体转化法(LiPofection Reagent) | 第33-34页 |
| ·空斑纯化 | 第34页 |
| ·病毒模板的制备(酚仿抽提法) | 第34页 |
| ·灭活疫苗的制备 | 第34-35页 |
| ·病毒的接种与灭活 | 第34页 |
| ·乳化 | 第34-35页 |
| ·猪伪狂犬病毒普通ELISA抗体检测方法 | 第35页 |
| ·gE鉴别ELISA检测方法 | 第35页 |
| ·病毒组织培养半数感染(TCID_(50))测定 | 第35-36页 |
| ·中和试验(固定病毒—稀释血清法) | 第36页 |
| ·数据处理 | 第36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-47页 |
| ·PRV Ea gE-/gI-缺失突变株的构建 | 第36-37页 |
| ·转移载体pIESE的构建 | 第36-37页 |
| ·PCR筛选的引物与条件 | 第37页 |
| ·缺失突变株的构建和筛选 | 第37-39页 |
| ·PRV Ea gI~-/gE~-的鉴定 | 第39-40页 |
| ·Southern杂交鉴定 | 第39页 |
| ·间接免疫荧光检测(indirect immunofluorescence assay,IFA) | 第39-40页 |
| ·蛋白质斑点印迹 | 第40页 |
| ·PRV Ea gI-/gE-免疫效果的研究 | 第40-47页 |
| ·PRV Ea gI-/gE-灭活疫苗的制备及检测 | 第40-42页 |
| ·PRV Ea gI~-/gE~-灭活疫苗安全性检测 | 第42-43页 |
| ·PRV Ea gI~-/gE~-灭活疫苗对靶动物和非靶动物保护力的检测 | 第43-47页 |
| ·PRV Ea gI~-/gE~-灭活疫苗对Balb/c小鼠的免疫和保护 | 第43-45页 |
| ·伪狂犬病病毒的中和抗体水平检测 | 第43页 |
| ·PRV-ELISA和PRV gE-ELISA抗体水平检测 | 第43-44页 |
| ·攻毒试验 | 第44-45页 |
| ·PRV Ea gI-/gE-灭活疫苗对断奶仔猪的免疫和保护 | 第45-47页 |
| ·伪狂犬病病毒的中和抗体水平检测 | 第45页 |
| ·PRV-ELISA和PRV gE-ELISA抗体水平检测 | 第45-46页 |
| ·攻毒试验 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-49页 |
| ·缺失突变株的构建 | 第47-48页 |
| ·PRV Ea gI-/gE-的免疫效果 | 第48-49页 |
| 6 结论 | 第49-50页 |
| 第二章 H5N1亚型血凝素蛋白假病毒的建立和免疫效果的研究 | 第50-91页 |
| 1 文献综述 | 第50-65页 |
| ·禽流感病毒特性及研究进展 | 第50-60页 |
| ·禽流感病毒病原学综述 | 第50-52页 |
| ·禽流感的分类 | 第50-51页 |
| ·禽流感病的生物学性质 | 第51页 |
| ·禽流感病毒的国际检测标准 | 第51-52页 |
| ·禽流感病毒分子生物学特征及其变异 | 第52-53页 |
| ·传播途径和流行病学调查 | 第53-54页 |
| ·消化道传播 | 第53页 |
| ·呼吸道传播 | 第53页 |
| ·垂直传播 | 第53-54页 |
| ·迁徙传播 | 第54页 |
| ·血凝素(Hemagglutinin,HA)基因的研究 | 第54-58页 |
| ·HA蛋白结构 | 第54-57页 |
| ·一级结构 | 第54-55页 |
| ·HA蛋白的三维结构及受体结合部位 | 第55-56页 |
| ·HA蛋白的生物学功能 | 第56-57页 |
| ·HA蛋白在入侵宿主细胞过程中的作用 | 第57-58页 |
| ·禽流感病毒的切割位点 | 第58页 |
| ·流感疫苗的研究进展 | 第58-60页 |
| ·灭活全病毒疫苗 | 第58-59页 |
| ·减毒活疫苗 | 第59页 |
| ·亚单位疫苗 | 第59页 |
| ·以哺乳动物细胞为基质制备流感疫苗 | 第59-60页 |
| ·基于反向遗传技术改造的流感疫苗 | 第60页 |
| ·DNA疫苗 | 第60页 |
| ·逆转录病毒及其载体的分子遗传学特性 | 第60-65页 |
| ·病毒载体的发展简史 | 第60-62页 |
| ·逆转录病毒载体的特征 | 第62页 |
| ·逆转录病毒的分子结构及其遗传特征 | 第62-64页 |
| ·慢病毒裁体 | 第64-65页 |
| ·假病毒体系 | 第65页 |
| 2 研究目的和意义 | 第65-66页 |
| 3 材料与方法 | 第66-78页 |
| ·材料 | 第66-73页 |
| ·质粒及细胞 | 第66-70页 |
| ·主要药品及试剂 | 第70页 |
| ·主要培养基 | 第70页 |
| ·抗生素的配制 | 第70-71页 |
| ·主要缓冲液的配制 | 第71-73页 |
| ·假病毒转染试剂 | 第71页 |
| ·质粒提取与鉴定试剂的配制缓冲液 | 第71页 |
| ·SDS-PAGE缓冲液 | 第71-72页 |
| ·Western blot缓冲液的配制 | 第72页 |
| ·其它试剂的配制 | 第72-73页 |
| ·实验动物 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-78页 |
| ·病毒RNA的提取及RT-PCR反应 | 第73-74页 |
| ·HA基因的克隆 | 第74页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第74页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第74页 |
| ·质粒的提取 | 第74-75页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第74-75页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第75页 |
| ·序列测定 | 第75页 |
| ·转移载体的构建 | 第75页 |
| ·假病毒的包装 | 第75-76页 |
| ·HA假病毒颗粒表达的检测 | 第76-77页 |
| ·Western-blot检测HA假病毒的表达 | 第76页 |
| ·FACS检测HA假病毒的表达 | 第76页 |
| ·细胞融合 | 第76-77页 |
| ·HA假病毒颗粒感染性的检测 | 第77页 |
| ·LacZ染色 | 第77页 |
| ·HA假病毒颗粒对不同细胞的感染 | 第77页 |
| ·HA假病毒颗粒pH值依赖性测定 | 第77页 |
| ·血凝价的检测(HA) | 第77页 |
| ·HA假病毒颗粒的形态学观察 | 第77页 |
| ·HA假病毒免疫功能的研究 | 第77-78页 |
| ·1%鸡红细胞悬液和4单位抗原的制备 | 第77-78页 |
| ·血凝(HA)和血凝抑制(HI) | 第78页 |
| ·免疫功能研究 | 第78页 |
| ·动物免疫与检测 | 第78页 |
| ·数据的统计分析 | 第78页 |
| 4 结果与分析 | 第78-87页 |
| ·HA基因的RT-PCR扩增结果 | 第78-79页 |
| ·序列测定与分析 | 第79-80页 |
| ·转移载体的构建 | 第80-81页 |
| ·HA蛋白表达的检测 | 第81-82页 |
| ·Western-blot | 第81页 |
| ·FACS法检测HA蛋白的表达 | 第81-82页 |
| ·细胞融合分析 | 第82-83页 |
| ·HA假病毒颗粒感染性的检测 | 第83页 |
| ·HA假病毒颗粒pH值依赖性测定 | 第83-84页 |
| ·血凝效价的检测 | 第84-85页 |
| ·HA假病毒颗粒的形态学观察 | 第85页 |
| ·HA假病毒免疫效果的研究 | 第85-87页 |
| 5 讨论 | 第87-90页 |
| ·HA假病毒的包装与鉴定 | 第88页 |
| ·HA假病毒的模拟流感病毒入侵宿主细胞 | 第88-89页 |
| ·HA假病毒对Balb/c免疫功能的研究 | 第89-90页 |
| 6 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 附录 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
