| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| ·引言 | 第11-12页 |
| ·BT的杀虫机理 | 第12-14页 |
| ·昆虫BT抗性机制的研究进展 | 第14-17页 |
| ·昆虫抗性品系的筛选 | 第14页 |
| ·昆虫Bt抗性的生化基础 | 第14-15页 |
| ·水解过程的改变 | 第14-15页 |
| ·结合位点的改变 | 第15页 |
| ·其他生化抗性机制 | 第15页 |
| ·Bt抗性的遗传基础 | 第15-17页 |
| ·Bt抗性遗传方式的研究 | 第15-16页 |
| ·遗传分析的方法 | 第16页 |
| ·鉴定抗性相关的基因 | 第16-17页 |
| ·受体蛋白的种类及作用 | 第17-21页 |
| ·氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN) | 第17-19页 |
| ·类钙粘蛋白(Cadherin-like protein) | 第19-20页 |
| ·其他受体蛋白 | 第20-21页 |
| ·受体蛋白的表达及功能研究 | 第21-23页 |
| ·APN的异源细胞表达 | 第21-22页 |
| ·类钙粘蛋白的异源细胞表达 | 第22-23页 |
| ·杆状病毒载体表达系统 | 第23-27页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统的优缺点 | 第23-24页 |
| ·Bac to Bac表达系统的原理 | 第24-25页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统的发展 | 第25-27页 |
| ·BaculoDirect Express System | 第25-26页 |
| ·家蚕核型多角体病毒—家蚕表达系统 | 第26-27页 |
| 第二章 本研究的内容和意义 | 第27-30页 |
| ·研究内容 | 第27页 |
| ·棉铃虫敏感、抗性品系的APN1基因的克隆 | 第27页 |
| ·棉铃虫敏感、抗性品系的APN1在Tn细胞中的表达 | 第27页 |
| ·重组棉铃虫敏感、抗性品系的APN1的纯化 | 第27页 |
| ·棉铃虫敏感、抗性品系APN活力测定 | 第27页 |
| ·技术路线 | 第27-28页 |
| ·棉铃虫APN1在Tn细胞中的表达及纯化技术路线 | 第27-28页 |
| ·棉铃虫敏感、抗性品系APN活力的测定技术路线 | 第28页 |
| ·研究目的与意义 | 第28-30页 |
| 第三章 棉铃虫敏感、抗性品系APN1基因克隆 | 第30-40页 |
| ·材料与方法 | 第30-36页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·供试昆虫 | 第30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30页 |
| ·酶与试剂 | 第30-31页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·常用储存液与缓冲液 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32-36页 |
| ·RNA的提取 | 第32页 |
| ·反转录 | 第32-33页 |
| ·APN1的扩增 | 第33页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第33-34页 |
| ·TA克隆 | 第34页 |
| ·转化DH5α | 第34-35页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第35页 |
| ·检测 | 第35-36页 |
| ·序列测定 | 第36页 |
| ·试验结果 | 第36-38页 |
| ·棉铃虫敏感、抗性品系APN1基因克隆 | 第36页 |
| ·APN1基因序列分析 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 棉铃虫敏感、抗性品系APN1在TN细胞中表达 | 第40-58页 |
| ·材料与方法 | 第40-50页 |
| ·试验材料 | 第40-44页 |
| ·酶与试剂 | 第40-41页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·常用储存液与缓冲液 | 第41-44页 |
| ·试验方法 | 第44-50页 |
| ·重组转移载体的构建 | 第44-45页 |
| ·重组杆粒的提取与鉴定 | 第45-46页 |
| ·细胞培养 | 第46页 |
| ·共转染与感染 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第48-50页 |
| ·试验结果 | 第50-56页 |
| ·重组转移质粒构建与鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组杆状病毒DNA Bacmid的鉴定 | 第51-53页 |
| ·重组蛋白表达与鉴定及病毒的滴度测定 | 第53-56页 |
| ·细胞形态反应 | 第53-54页 |
| ·滴度测定 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE结果 | 第54-55页 |
| ·Ligand blot结果 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·表达系统的选择 | 第56-57页 |
| ·重组棉铃虫敏感、抗性品系APN1蛋白与毒素的结合能力 | 第57-58页 |
| 第五章 重组棉铃虫敏感、抗性品系APN1的纯化 | 第58-63页 |
| ·材料与方法 | 第58-60页 |
| ·试验材料 | 第58-59页 |
| ·试剂和酶 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·常用储存液与缓冲液 | 第58-59页 |
| ·试验方法 | 第59-60页 |
| ·样品的制备 | 第59页 |
| ·Ni离子亲和层析 | 第59页 |
| ·透析 | 第59-60页 |
| ·试验结果 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 棉铃虫敏感、抗性品系APN活力测定 | 第63-67页 |
| ·材料与方法 | 第63-65页 |
| ·试验材料 | 第63页 |
| ·供试昆虫 | 第63页 |
| ·酶与试剂 | 第63页 |
| ·常用储存液与缓冲液 | 第63页 |
| ·试验方法 | 第63-65页 |
| ·BBMV的提取 | 第63-64页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第64页 |
| ·APN活性的测定 | 第64-65页 |
| ·试验结果 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第七章 小结 | 第67-68页 |
| ·棉铃虫敏感、抗性品系的APN1基因的克隆 | 第67页 |
| ·棉铃虫敏感、抗性品系的APN1在TN细胞中的表达 | 第67页 |
| ·重组棉铃虫敏感、抗性品系的APN1的纯化 | 第67页 |
| ·棉铃虫敏感、抗性品系APN活力测定 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 附录 | 第82页 |
